Question

如下圖是將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)�入�?xì)菌B細(xì)胞內(nèi)制造“工程菌”示意圖。所用載體為質(zhì)粒A。已知細(xì)菌B細(xì)胞內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因，質(zhì)粒A導(dǎo)入細(xì)菌B后，其上的基因能得到表達(dá)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）人工獲得目的基因的途徑一般有哪兩條？

（2）如何將目的基因和質(zhì)粒相結(jié)合形成重組質(zhì)粒（重組DNA分子）？

（3）目前把重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌細(xì)胞時(shí)，效率還不高；導(dǎo)入完成后得到的細(xì)菌，實(shí)際上有的根本沒(méi)有導(dǎo)入質(zhì)粒，有的導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒A，只有少數(shù)導(dǎo)入的是重組質(zhì)粒。此處可以通過(guò)如下步驟來(lái)鑒別得到的細(xì)菌是否導(dǎo)入了質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒：將得到的細(xì)菌涂布在一個(gè)有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，能夠生長(zhǎng)的就是導(dǎo)入了質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒，反之則沒(méi)有。使用這種方法鑒別的原因是________。

（4）若把通過(guò)鑒定證明導(dǎo)入了普通質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒的細(xì)菌放在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，會(huì)發(fā)生的現(xiàn)象是________。原因是________。

（5）導(dǎo)入細(xì)菌B細(xì)胞中的目的基因成功表達(dá)的標(biāo)志是什么？

Answer 1

答案：
解析：

答案：（1）（2）（5）見(jiàn)方法指導(dǎo)。 　�。�3）普通質(zhì)粒A和重組質(zhì)粒都含有抗氨芐青霉素基因 　�。�4）有的能生長(zhǎng)，有的不能生長(zhǎng)　原因?qū)�入普通質(zhì)粒A的細(xì)菌能生長(zhǎng)，因?yàn)槠胀ㄙ|(zhì)粒A上有抗四環(huán)素基因；導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)菌不能生長(zhǎng)，因?yàn)槟康幕�因插在抗四環(huán)素基因中，抗四環(huán)素基因的結(jié)構(gòu)被破壞 　　 　�。�2）將目的基因和質(zhì)粒相結(jié)合形成重組質(zhì)粒的過(guò)程是：①用一定的限制酶切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)有黏性末端的切口；②用同種限制酶切斷目的基因，產(chǎn)生相同的黏性末端；③將切下的目的基因片段插入到質(zhì)粒的切口處，再加入適量的DNA連接酶，使質(zhì)粒與目的基因結(jié)合成重組質(zhì)粒。 　�。�3）檢測(cè)質(zhì)粒或重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，均需利用質(zhì)粒上某些標(biāo)記基因的特性，即對(duì)已經(jīng)導(dǎo)入質(zhì)�；蛑亟M質(zhì)粒處理的、本身無(wú)相應(yīng)特性的受體細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)受體細(xì)胞是否具有相應(yīng)的特性來(lái)確定。本題利用質(zhì)粒上抗四環(huán)素和抗氨芐青霉素這兩個(gè)特性以及它們?cè)谫|(zhì)粒上的位置進(jìn)行目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞的檢測(cè)。抗氨芐青霉素這種選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)經(jīng)過(guò)導(dǎo)入質(zhì)粒處理的受體細(xì)胞，凡能生長(zhǎng)的則表明質(zhì)粒導(dǎo)入成功；不能生長(zhǎng)的則無(wú)質(zhì)粒導(dǎo)入。 　　（4）抗四環(huán)素基因不僅在質(zhì)粒上，而且它的位置正是目的基因插入質(zhì)粒之處，因此有目的基因插入質(zhì)粒形成重組質(zhì)粒時(shí)，此處的抗四環(huán)素基因的結(jié)構(gòu)和功能就會(huì)被破壞，當(dāng)然含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞就不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而質(zhì)粒上無(wú)目的基因插入的，四環(huán)素基因結(jié)構(gòu)是完整的，這種受體細(xì)胞就能在含四環(huán)互素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。 　�。�5）基因成功表達(dá)的標(biāo)志是受體細(xì)胞通過(guò)轉(zhuǎn)錄、翻譯過(guò)程合成出相應(yīng)的蛋白質(zhì)，即人的生長(zhǎng)激素。