Question

【題目】抗體的基因工程改造經(jīng)歷了最早期的人鼠嵌合單抗、人源化單抗，以及近年來的完全人源化單抗 3 個發(fā)展階段。

鼠源單抗 人-鼠嵌合單抗 人源化單抗 完全人源化單抗

請回答：

（1）人-鼠嵌合單抗是通過從_____細(xì)胞中提取總RNA，在_____酶的作用下形成互補(bǔ) DNA， 然后以此 DNA 為模板擴(kuò)增得到功能性可變區(qū)基因，再與人抗體支架區(qū)基因通過_____ 連接，插入適當(dāng)表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)生。

（2）人源化單抗技術(shù)主要是通過基因工程的方法將鼠源抗體的_____，即互補(bǔ)決定區(qū)組裝到人源抗體的支架區(qū)。該技術(shù)的缺點(diǎn)之一，在進(jìn)行人源化改造之前，必須先制備出鼠源性抗某一特定抗原的_____。

（3）完全人源化單抗包括噬菌體展示庫技術(shù)和轉(zhuǎn)基因鼠技術(shù)。噬菌體展示抗體庫技術(shù)：將人類抗體____序列用_____技術(shù)擴(kuò)增出來后插入到噬菌體蛋白的編碼基因中，使抗體與噬菌體外殼蛋白形成融合蛋白而被展示到噬菌體表面（可展示針對幾乎所有抗原的人源性抗體）。完全人抗體的制備則是來源于轉(zhuǎn)基因小鼠：主要操作是通過_____技術(shù)將小鼠自身的抗體編碼基因替換為人類抗體編碼基因，而小鼠免疫系統(tǒng)中的其他功能組件并不受影響。

Answer 1

【答案】雜交瘤 逆轉(zhuǎn)錄 DNA連接酶 識別抗原分子的特殊部分（或抗原結(jié)合位點(diǎn)） 單克隆抗體 基因文庫 PCR 基因敲除

【解析】

1、在制備過程中需要將抗原首先注入生物體內(nèi)，是其產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞，再用動物細(xì)胞融合技術(shù)將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，并篩選出能大量增殖和產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，最后經(jīng)過體外或體內(nèi)培養(yǎng)，獲取單克隆抗體。

2、蛋白質(zhì)工程指以蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行基因改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需要。

（1）單抗是雜交瘤細(xì)胞合成和分泌的。生產(chǎn)人——鼠嵌合單抗時(shí)，可先通過從鼠的雜交瘤細(xì)胞中提取總RNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下形成互補(bǔ)DNA，再擴(kuò)增得到鼠抗體的功能性可變區(qū)基因，再與人抗體支架區(qū)基因通過DNA連接酶連接，插入適當(dāng)表達(dá)載體。

（2）單抗可以識別抗原分子的特殊部位。人源化可減少鼠源抗體的免疫原性，人源化單抗技術(shù)主要是通過基因工程的方法將鼠源抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)，即互補(bǔ)決定區(qū)組裝到人源抗體的支架區(qū)。但人源化抗體也有一些不容忽視的缺點(diǎn)，如存在一定的免疫原性和親和力變低等。此外，在進(jìn)行人源化改造之前，必須先制備出鼠源性抗某一特定抗原的單克隆抗體，這耗時(shí)較長且成本高。

（3）噬菌體展示抗體庫技術(shù)是將噬菌體展示及抗體組合文庫技術(shù)相結(jié)合，將人類抗體基因文庫序列用PCR技術(shù)擴(kuò)增出來后插入到噬菌體蛋白的編碼基因中，使抗體與噬菌體外殼蛋白形成融合蛋白而被展示到噬菌體表面。每一個噬菌體因攜帶的抗體基因不同而使其表面可能展示不一樣的抗體分子。因此，理論上噬菌體展示庫可以展示針對幾乎所有抗原的人源性抗體。通過基因敲除技術(shù)將小鼠自身的抗體編碼基因替換為人類抗體編碼基因，而小鼠免疫系統(tǒng)中的其他功能組件并不受影響。當(dāng)此種轉(zhuǎn)基因小鼠受到某種抗原刺激時(shí)，可直接產(chǎn)生和人源相同的的抗體。