Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題

（一）自生固氮菌是一類能獨(dú)立固定氮?dú)獾募?xì)菌，其中有些好氧種類能產(chǎn)生 PHB（一種生物可降解的熱塑性塑料）。現(xiàn)欲從活性污泥中分離、純化、篩選出高產(chǎn) PHB 的固氮菌，操作流程如下：采集土樣→富集培養(yǎng)→分離、純化培養(yǎng)→初步篩選 PHB 固氮菌→篩選高產(chǎn) PHB 固氮菌→保存?zhèn)溆谩Ｕ?qǐng)回答：

（1）富集培養(yǎng)時(shí)，為達(dá)到篩選自生固氮菌的目的，在配制培養(yǎng)液時(shí)不應(yīng)添加________ 。培養(yǎng)時(shí)要將裝有培養(yǎng)液的錐形瓶放置在__________上振蕩培養(yǎng)，主要目的是為細(xì)菌的生長(zhǎng)提供 ____________。

（2）用于篩選高表達(dá)量菌株的方法之一是經(jīng)涂布分離獲得______。涂布分離時(shí)用_______ 將菌液均勻涂布在培養(yǎng)基上，此時(shí)所使用的培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)時(shí)有所不同，添加了一定量的_____________。

（3）在純化過程中，在固體培養(yǎng)基上劃線時(shí)，下列操作正確的是__________。

A．接種環(huán)采用 70%酒精滅菌

B．接種時(shí)應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行

C．劃線時(shí)要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連

D．劃線分離時(shí)，需要把接種環(huán)深入到培養(yǎng)基中進(jìn)行接種

（二）毛角蛋白11型中間絲（KIF II）基因與絨山羊的羊絨質(zhì)量密切相關(guān)，獲得轉(zhuǎn)KIF II基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡(jiǎn)單流程如圖：

（1）轉(zhuǎn)基因過程用到的工具酶有_______________和____________。

（2）在過程②中，用________處理將皮膚組織塊分散成單個(gè)成纖維細(xì)胞。由于人們對(duì)動(dòng)物細(xì)胞所貓營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需在培養(yǎng)液中加入一定量的_________，在培養(yǎng)過程中，應(yīng)將培養(yǎng)瓶宜于__________中培養(yǎng)。

（3）若要獲得多只相同的轉(zhuǎn)基因山羊，可對(duì)圖中早期胚胎進(jìn)行_________后進(jìn)行胚胎移植。

（4）下列有關(guān)墓因工程的敘述，正確的是___________。

A．切割目的基因和載體DNA時(shí)為獲得相同的枯性末端，必須用相同的限制性核酸內(nèi)切酶

B．基因工程的原理是基因重組，其核心是上圖中的過程④

C．圖示過程獲得的轉(zhuǎn)基因絨山羊并不是克隆動(dòng)物

D．重組表達(dá)載體上含有RNA聚合的的識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)

Answer 1

【答案】含氮物質(zhì)（氮源） 搖床 充足的氧氣 單菌落 玻璃刮刀 瓊脂糖 B 限制性核酸內(nèi)切酶 DNA連接酶 胰蛋白酶 動(dòng)物血清 CO2培養(yǎng)箱 胚胎分割 D

【解析】

微生物分離方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法，都是為了獲得單菌落，所以經(jīng)涂布分離可以獲得單菌落，該過程需要倒平板制備固體培養(yǎng)基，需要添加凝固劑瓊脂；轉(zhuǎn)基因獲得高絨質(zhì)絨山羊過程中，需要用到限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶，圖中①表示構(gòu)建基因表達(dá)載體，②表示胰蛋白酶處理成單個(gè)細(xì)胞，③表示用促性腺激素進(jìn)行超數(shù)排卵處理，④表示核移植。

（一）（1）富集培養(yǎng)時(shí)，為達(dá)到篩選自生固氮菌的目的，在配制培養(yǎng)液時(shí)不應(yīng)添加氮源。培養(yǎng)時(shí)要將裝有培養(yǎng)液的錐形瓶放置在搖床上振蕩培養(yǎng)，主要目的是為細(xì)菌的生長(zhǎng)提供充足的氧氣。

（2）用于篩選高表達(dá)量菌株的方法之一是經(jīng)涂布分離獲得單菌落。涂布分離時(shí)用玻璃刮刀將菌液均勻涂布在培養(yǎng)基上，此時(shí)所使用的培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)時(shí)有所不同，富集培養(yǎng)是液體培養(yǎng)基，分離單菌落需要固體培養(yǎng)基，故添加了一定量的瓊脂糖。

（3）在純化過程中，在固體培養(yǎng)基上劃線時(shí)，一定要注意嚴(yán)格無菌條件，其中接種環(huán)采用灼燒滅菌，A錯(cuò)誤；接種時(shí)應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行，B正確；劃線時(shí)最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線不能相連，C錯(cuò)誤；劃線分離時(shí)，需要把接種環(huán)接觸到培養(yǎng)基表面進(jìn)行接種，而不能深入到培養(yǎng)基中，D錯(cuò)誤；故正確的是B。

（二）（1）①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，首先需要限制酶切割含有目的基因的DNA和運(yùn)載體DNA，再用DNA連接酶連接目的基因和運(yùn)載體形成重組質(zhì)粒，故用到的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。

（2）在過程②中，用胰蛋白酶處理將皮膚組織塊分散成單個(gè)成纖維細(xì)胞。由于人們對(duì)動(dòng)物細(xì)胞所貓營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需在培養(yǎng)液中加入一定量的動(dòng)物血清，在培養(yǎng)過程中，應(yīng)將培養(yǎng)瓶宜于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

（3）若要獲得多只相同的轉(zhuǎn)基因山羊，可對(duì)圖中早期胚胎進(jìn)行胚胎分割后進(jìn)行胚胎移植。

（4）切割目的基因和載體DNA時(shí)為獲得相同的枯性末端，一般用相同的限制性核酸內(nèi)切酶，也可用兩種限制性內(nèi)切酶，A錯(cuò)誤；基因工程的原理是基因重組，其核心是上圖中的過程①，B錯(cuò)誤；圖示過程獲得的轉(zhuǎn)基因絨山羊，利用了核移植、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎分割等技術(shù)，屬于克隆動(dòng)物，C錯(cuò)誤；重組表達(dá)載體上含有RNA聚合的的識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)，以起始轉(zhuǎn)錄，D正確；故正確的是D。