Question

【題目】大腸桿菌是人和許多動(dòng)物腸道中最主要且數(shù)量最多的一類(lèi)細(xì)菌，含有2000種以上的蛋白質(zhì)；大腸桿菌的數(shù)量是檢測(cè)自來(lái)水是否受糞便污染的最直接的指標(biāo)�；卮鹣铝袉�(wèn)題：

（1）利用凝膠色譜法分離提取到的部分大腸桿菌蛋白質(zhì)時(shí)，等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，加入pH為7．0、濃度為20mmol/L的_______________到適當(dāng)高度進(jìn)行洗脫，結(jié)果甲蛋白質(zhì)先洗脫出來(lái)，乙蛋白質(zhì)后洗脫出來(lái)，則相對(duì)分子質(zhì)量較大的是_______蛋白質(zhì)。

（2）裝填凝膠色譜柱時(shí)，色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，原因是____________________________。

（3）通過(guò)濾膜法可以測(cè)定自來(lái)水中大腸桿菌的數(shù)目：一定體積的自來(lái)水樣過(guò)濾后，將濾膜放在伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、瓊脂、乳糖、伊紅美藍(lán)水溶液）上培養(yǎng)，大腸桿菌的代謝產(chǎn)物能與伊紅-美藍(lán)反應(yīng)，使菌落呈黑色。根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的數(shù)目，計(jì)算出大腸桿菌的數(shù)量。

①伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基屬于_____（填“選擇”或“鑒別”）培養(yǎng)基，蛋白胨的作用_______________。

②在微生物培養(yǎng)過(guò)程中，常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和_____________。

③某研究小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是_____；

④濾膜法是根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的數(shù)目來(lái)推測(cè)樣品中的活菌數(shù)，其原理是______。

Answer 1

【答案】磷酸緩沖液 甲 氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果 鑒別 提供碳源、氨源、維生素 高壓蒸汽滅菌 檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格 （當(dāng)樣品中細(xì)菌濃度低時(shí)）培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落來(lái)源于樣品中的一個(gè)活菌

【解析】

1、凝膠色譜法的原理是：小分子蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長(zhǎng)、移動(dòng)速度較慢，后被洗脫出來(lái)；而分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較短，移動(dòng)速度較快，先被洗脫出來(lái)。

2、大腸桿菌的代謝產(chǎn)物（有機(jī)酸）能與伊紅-美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤。

3、微生物培養(yǎng)基的主要成分包括碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子。

（1）利用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)，所用的洗脫液是磷酸緩沖液；根據(jù)凝膠色譜法的原理可知，蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量較大的先洗脫出來(lái)，而實(shí)驗(yàn)結(jié)果是甲蛋白質(zhì)先洗脫出來(lái)，乙蛋白質(zhì)后洗脫出來(lái)，說(shuō)明相對(duì)分子質(zhì)量較大的是甲蛋白質(zhì)。

（2）由于氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果，因此裝填凝膠色譜柱時(shí)，色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在。

（3）①根據(jù)以上分析已知，伊紅-美藍(lán)可以使得大腸桿菌菌落出現(xiàn)深紫色并帶有金屬光澤，說(shuō)明伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中蛋白胨可以為大腸桿菌提供提供碳源、氮源、維生素。

②在微生物培養(yǎng)過(guò)程中，常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌的一種）。

③在涂布接種前，為了檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，需要隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間。

④濾膜法的原理是培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落來(lái)源于樣品中的一個(gè)活菌，所以根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的數(shù)目來(lái)推測(cè)樣品中的活菌數(shù)。