Question

【題目】大腸桿菌pUC18質(zhì)粒是基因工程中常用的運(yùn)載體。某限制酶在此質(zhì)粒上的唯一酶切位點(diǎn)位于LacZ基因中，如果沒(méi)有插入外源基因，LacZ基因便可表達(dá)出β-半乳糖苷酶，當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和X-gal時(shí)，X-gal便會(huì)被β-半乳糖苷酶水解成藍(lán)色，大腸桿菌將形成藍(lán)色菌落。反之，則形成白色菌落。下圖表示利用此質(zhì)粒實(shí)施基因工程的主要流程。請(qǐng)分析并回答：

（1）已獲得的目的基因可利用_____________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。

（2）目的基因插入質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程中，需要DNA連接酶恢復(fù)___________鍵。

（3）將試管Ⅰ中的物質(zhì)和大腸桿菌共同置于試管Ⅱ的目的是____________________；大腸桿菌需事先用Ca2+進(jìn)行處理，目的是______________________________________。

（4）將試管Ⅱ中的菌液接種于選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)基中除去含有大腸桿菌必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)因子外，還應(yīng)加入IPTG、X-gal以及氨芐青霉素，其中加入氨芐青霉素的作用是篩選出__________________。

（5）若觀察到培養(yǎng)基上出現(xiàn)______色菌落，則說(shuō)明大腸桿菌中已成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。如果作為受體細(xì)胞的大腸桿菌也含有LacZ基因，則不利于重組質(zhì)粒的篩選，原因是無(wú)論大腸桿菌是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒，菌落均會(huì)呈現(xiàn)_________。

Answer 1

【答案】 PCR 磷酸二酯鍵 進(jìn)行轉(zhuǎn)化(將目的基因?qū)�入大腸桿菌) 使大腸桿菌細(xì)胞處于感受態(tài)(使大腸桿菌易于吸收環(huán)境中的DNA) 導(dǎo)入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌 白 藍(lán)色

【解析】試題分析：分析題圖：大腸桿菌pUC18質(zhì)粒含有氨芐青霉素抗性基因和LacZ基因，但限制酶的切割位點(diǎn)位于LacZ基因上，所以構(gòu)建成的重組質(zhì)粒含有氨芐青霉素抗性基因，但LacZ基因被破壞，不能產(chǎn)生β一半乳糖苷酶。試管Ⅰ中是基因表達(dá)載體，試管Ⅱ中是大腸桿菌，將試管I中的物質(zhì)和大腸桿菌共同置于試管Ⅱ的目的是進(jìn)行轉(zhuǎn)化，最后用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

（1）PCR技術(shù)能在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因，所以已獲得的目的基因可利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。

（2）基因工程中，DNA連接酶作用后形成的是磷酸二脂鍵。

（3）將試管Ⅰ中的物質(zhì)和大腸桿菌共同置于試管Ⅱ的目的是使目的基因進(jìn)人受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)，即進(jìn)行轉(zhuǎn)化；大腸桿菌需事先用Ca2+進(jìn)行處理，增大細(xì)胞壁的通透性，使之處于易于吸收周?chē)�環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)。

（4）由于重組質(zhì)粒含有氨芐青霉素抗性基因，且沒(méi)有被破壞，因此導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌能抗氨芐青霉素，所以培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素的作用是篩選出導(dǎo)入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌。

（5）重組質(zhì)粒上的LacZ基因被破壞，不能產(chǎn)生β一半乳糖苷酶，若大腸桿菌中已成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒，則其在含有IPTG和X-gal的培養(yǎng)基中形成白色菌落．如果作為受體細(xì)胞的大腸桿菌也含有LacZ基因，則無(wú)論大腸桿菌是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒，均會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色菌落。