Question

【題目】2006年，Yamanaka將Oct﹣4、Sox2、c﹣Myc和K1f4四個(gè)轉(zhuǎn)錄因子導(dǎo)入小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，獲得“誘導(dǎo)多能干細(xì)胞”（iPSc）。雖然iPSC具有非常高的應(yīng)用價(jià)值和前景，但應(yīng)用于臨床仍有問(wèn)題阻礙，例如其供體細(xì)胞需從患者皮膚穿刺獲得皮膚成纖維細(xì)胞，給患者帶來(lái)痛苦，同時(shí)誘導(dǎo)效率非常低，初始化效率甚至低于0.01%. 因此近年來(lái)iPSc研究熱點(diǎn)為如何選用來(lái)源便捷、數(shù)目充足的成熟體細(xì)胞，以及如何提高基因的轉(zhuǎn)錄效率。

（1）iPSc能在適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)條件下分化為3個(gè)胚層的細(xì)胞，具有多能分化能力，類似_____細(xì)胞的特性。

（2）有科學(xué)家利用成熟的T淋巴細(xì)胞作為供體細(xì)胞，成熟的T淋巴細(xì)胞在體外不能增殖分化，利用刀豆蛋白A（ConA）活化成熟T淋巴細(xì)胞，使之增殖分化為_____細(xì)胞，在這里刀豆蛋白A（ConA）充當(dāng)_____。

（3）為提高誘導(dǎo)為iPSc的效率，首先應(yīng)提高運(yùn)載體的導(dǎo)入受體細(xì)胞的效率，科學(xué)家利用HIV﹣1病毒改造的（無(wú)致病性，高感染性）慢病毒作為載體，這類慢病毒屬于_____（RNA/DNA）病毒。同時(shí)在慢病毒中構(gòu)建GFP基因（綠色熒光蛋白基因）作為_____，以便直觀方便的檢驗(yàn)慢病毒是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。

（4）為驗(yàn)證慢病毒對(duì)T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，科學(xué)家用腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)T淋巴細(xì)胞作為對(duì)照，設(shè)置不同MOI（MOI＝轉(zhuǎn)染時(shí)的病毒顆粒數(shù)/細(xì)胞數(shù)）實(shí)驗(yàn)組得到下圖結(jié)果，由此可得出的結(jié)論為_____________________________________________________________________________。

Answer 1

【答案】胚胎肝細(xì)胞 效應(yīng)T細(xì)胞、記憶 抗原 RNA 標(biāo)記基因 在相同的MOI下與腺病毒相比，慢病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率有明顯提高，且隨著MOI的提高對(duì)T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率也越高

【解析】

干細(xì)胞是具有分裂和分化能力的細(xì)胞，細(xì)胞的分化程度越高，分裂能力越強(qiáng)，因此，高度分化的細(xì)胞一般不會(huì)分裂，但是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將有關(guān)基因?qū)�入到分化的�?xì)胞中，使細(xì)胞恢復(fù)分裂和分化能力。

（1）胚胎肝細(xì)胞是具有分裂和分化能力，能夠發(fā)育成不同的組織和器官，iPSc能在適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)條件下分化為3個(gè)胚層的細(xì)胞，具有多能分化能力，因此，類似胚胎干細(xì)胞的特性。

（2）細(xì)胞免疫過(guò)程中，T細(xì)胞增殖分化形成記憶細(xì)胞和效應(yīng)T細(xì)胞，因此這里刀豆蛋白A（ConA）充當(dāng)抗原。

（3）HIV病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，這類病毒RNA病毒，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，綠色熒光蛋白基因作為標(biāo)記基因以便直觀方便的檢驗(yàn)慢病毒是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。

（4）分析柱狀圖可知，實(shí)驗(yàn)的自變量是病毒的種類和不同的MOI，因此，在相同的MOI下與腺病毒相比，慢病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率明顯提高，且隨著MOI的提高對(duì)T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率也提高。