Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞�？蒲腥藛T利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，其技術(shù)流程如圖（圖中數(shù)字序號表示的是相關(guān)過程）。請回答：

(1)過程①將進(jìn)行培養(yǎng)的上皮細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞中，接受細(xì)胞核的卵母細(xì)胞應(yīng)處于______________時期。

(2)過程②利用的技術(shù)是______________，當(dāng)重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時，可從其________分離出具有全能性的ES細(xì)胞。

(3)過程③中獲取的目的基因是__________________________，若要將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的方法是________________，利用PCR技術(shù)對目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。為了檢測ES細(xì)胞的DNA上是否插入了目的基因，可采用__________技術(shù)。

(4)按此方法和圖示技術(shù)流程，完成Rag2基因缺失小鼠的基因治療涉及的酶有__________和耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）等。為檢測Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞中的蛋白質(zhì)，用________________進(jìn)行雜交實驗。

Answer 1

【答案】MⅡ中 早期胚胎培養(yǎng) 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) Rag2基因 顯微注射法 DNA分子雜交 DNA連接酶、限制酶、胰蛋白酶 抗Rag2蛋白的抗體

【解析】

分析題圖：圖示是利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的過程圖解，其中①表示核移植過程，②表示早期胚胎培養(yǎng)過程，③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞。

（1）MⅡ中期的卵母細(xì)胞含有細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)和環(huán)境條件，故接受細(xì)胞核的卵母細(xì)胞應(yīng)處于MⅡ中期。

（2）過程②利用的技術(shù)是早期胚胎培養(yǎng)，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將來發(fā)育成胎兒的各種組織，滋養(yǎng)層細(xì)胞將來發(fā)育成胎膜和胎盤，故當(dāng)重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出具有全能性的ES細(xì)胞。

（3）圖示利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，可推知過程③中獲取的目的基因是（正常的）Rag2基因。將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞常用顯微注射法。為了檢測ES細(xì)胞的DNA上是否插入了目的基因，可采用DNA分子雜交技術(shù)。

（4）步驟③中，在構(gòu)建含有Rag2基因的表達(dá)載體時，可以根據(jù)Rag2基因的脫氧核苷酸序列設(shè)計引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段。分離、培養(yǎng)ES細(xì)胞過程中需要用胰蛋白酶分散細(xì)胞。PCR技術(shù)擴(kuò)增過程中用耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）。基因?qū)�入過程中需要用限制性酶核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶。基因表達(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，所以提取小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)-抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交。