Question

【題目】自然界里有多種微生物，將其進行合理的篩選、培養(yǎng)和應(yīng)用，能給醫(yī)藥和化工等生產(chǎn)領(lǐng)域帶來巨大經(jīng)濟效益�；卮鹣铝袉栴}。

（1）對培養(yǎng)基進行滅菌時，多采取____________法，而對接種環(huán)或涂布器滅菌時則用____________法，若要將微生物采用平板劃線法進行分離操作，在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)進行了5次劃線，則需要對接種環(huán)灼燒____________次。平板劃線在做第二次及其后的劃線操作時，要從上次劃線的____________開始劃線，最后一次劃的線不能與第一次劃的線____________。

（2）將接種后的固體培養(yǎng)基和一個未接種的固體培養(yǎng)基放入恒溫箱中____________培養(yǎng)，以減少培養(yǎng)基中的水分揮發(fā)。其中，培養(yǎng)未接種的固體培養(yǎng)基是為了____________。長期保存菌種時，應(yīng)將培養(yǎng)的菌液與____________充分混勻后，放在-20℃的冷凍箱中保存。

（3）甲、乙兩組同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某種微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下每隔一段時間記錄數(shù)據(jù)（統(tǒng)計時間內(nèi)微生物總數(shù)小于環(huán)境容納量），得到以下結(jié)果：

培養(yǎng)時間(小時)	24	48	72	96
甲組菌落均值(個)	18	25	36	32
乙組菌落均值(個)	20	28	38	32

計數(shù)時最好取培養(yǎng)____________小時記錄的菌落數(shù)作為實驗結(jié)果，一方面是由于培養(yǎng)時間較短，會遺漏菌落數(shù)目，另一方面是由于____________。

Answer 1

【答案】高壓蒸汽滅菌 灼燒滅菌 6 末端 相連（或相接、相交等意思正確） 倒置 作為對照組，排除培養(yǎng)基被雜菌污染 甘油 72 培養(yǎng)時間過長，兩個或多個菌落連成一個菌落

【解析】

1、微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵是無菌操作技術(shù)，無菌操作過程中的滅菌方法主要有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法滅菌。高壓蒸汽滅菌適用于對一般培養(yǎng)基和玻璃器皿的滅菌。干熱滅菌適用于空玻璃器皿的滅菌，凡帶有橡膠的物品和培養(yǎng)基，都不能進行干熱滅菌。無菌室緩沖間和接種箱常用紫外線燈作空氣滅菌。微生物接種時的金屬接種工具和試管口可以用灼燒滅菌。

2、平板劃線操作的基本步驟是：（一）右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰滅菌，待涼后，在火焰旁打開盛有菌液的試管棉塞，并將試管口通過火焰，將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液，沾取一環(huán)菌液，將試管口通過火焰并塞上棉塞。（二）左手斜持瓊脂平板，皿蓋打開一條縫，右手于火焰近處將接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋，接種環(huán)不應(yīng)劃破培養(yǎng)基表面。（三）燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留菌液，待冷卻（是否冷卻，可先在培養(yǎng)基邊緣處試觸，若瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試），從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)內(nèi)劃線，重復(fù)以上操作，在第三四五區(qū)內(nèi)劃線，注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。（四）將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

（1）對培養(yǎng)基進行滅菌時，多采取高壓蒸汽滅菌法，而對接種環(huán)或涂布器滅菌時則用灼燒滅菌法。接種環(huán)在每次接種前都要灼燒滅菌，最后一次接種完也要滅菌，所以在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)進行了5次劃線，則需要對接種環(huán)灼燒6次。平板劃線在做第二次及其后的劃線操作時，要從上次劃線的末端開始劃線，使菌體的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終獲得由單個菌體形成的單個菌落。最后一次劃的線不能與第一次劃的線相連。

（2）將接種后的固體培養(yǎng)基和一個未接種的固體培養(yǎng)基放入恒溫箱中倒置培養(yǎng)，以減少培養(yǎng)基中的水分揮發(fā)。培養(yǎng)未接種的固體培養(yǎng)基是為了作為對照組，排除培養(yǎng)基被雜菌污染。長期保存菌種時，應(yīng)將培養(yǎng)的菌液與甘油充分混勻后，放在-20℃的冷凍箱保存。

（3）根據(jù)表中數(shù)據(jù)可知，甲組和乙組中的菌落數(shù)都在72時達到最大，由此推知最好取72小時記錄的菌落數(shù)作為實驗結(jié)果，原因是①培養(yǎng)時間不足會導(dǎo)致遺落菌落的數(shù)目；②培養(yǎng)時間過長會導(dǎo)致兩個或多個菌落連成一個菌落，使計數(shù)不準(zhǔn)確。