Question

【題目】乙型腦炎病毒（JEV）是一種 RNA 病毒，病毒的 E 蛋白參與病毒復(fù)制過程。研究人員利用基因重組的方法構(gòu)建了二種新型 JEV 疫苗：DNA 疫苗和 E 蛋白疫苗。圖示主要流程。

【1】過程①為_____；過程②所需要的酶是_____。

【2】研究發(fā)現(xiàn)：受體細(xì)胞為大腸桿菌或酵母菌時，所形成的 E 蛋白結(jié)構(gòu)不完全相同。原因是 。

A.大腸桿菌無細(xì)胞核，酵母菌有細(xì)胞核可進(jìn)行基因轉(zhuǎn)錄

B.大腸桿菌無膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器，無法對蛋白質(zhì)進(jìn)一步加工

C.兩種受體細(xì)胞在基因表達(dá)時所使用的密碼子不同

D.兩種受體細(xì)胞在基因表達(dá)時所遵循的堿基互補(bǔ)配對原則不同

【3】關(guān)于 DNA 疫苗的敘述，正確的是

A.分子較小，結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定B.能通過 PCR 技術(shù)增加生產(chǎn)量

C.能激活機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫D.DNA 疫苗已廣泛用于人工免疫

如圖表示N 質(zhì)粒和成功導(dǎo)入 E 蛋白基因的質(zhì)粒 EN。為篩選含 EN 的菌落，可用含不同抗生素： 氨芐青霉素和四環(huán)素的平板培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，現(xiàn)得到 A、B、C 三類菌落，生長情況如表 。（‘+’代表生長，‘-’代表不生長）

平 板 菌 落	A	B	C
無抗生素	+	+	+
氨芐青霉素	+	+	-
四環(huán)素	+	-	-
氨芐青霉素+四環(huán)素	+	-	-

【4】表 中無抗生素平板培養(yǎng)基的作用是_____。另三種培養(yǎng)基屬于下列選項(xiàng)中的_____。

A．固體培養(yǎng)基 通用培養(yǎng)基 B．固體培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基

C．液體培養(yǎng)基 通用培養(yǎng)基 D．液體培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基

【5】據(jù)圖 和表判斷， 。

A.A 菌落細(xì)胞被導(dǎo)入了N 質(zhì)粒B.B 菌落細(xì)胞被導(dǎo)入 EN 質(zhì)粒

C.C 菌落細(xì)胞未被導(dǎo)入任何質(zhì)粒span style="width:63.77pt; display:inline-block; -aw-tabstop-align:left; -aw-tabstop-pos:207.65pt">D.兩種抗生素均能抑制 E 蛋白表達(dá)

Answer 1

【答案】

【1】 逆轉(zhuǎn)錄 DNA連接酶、限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）

【2】B

【3】ABC

【4】 對照 B

【5】ABC

【解析】

基因表達(dá)載體的基本結(jié)構(gòu)包括復(fù)制原點(diǎn)、目的基因、標(biāo)記基因、啟動子、終止子等。根據(jù)題干信息和圖形分析，P0是載體質(zhì)粒，其含有的氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr）都屬于標(biāo)記基因，可以用檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞；EcoRV酶為限制酶，其切割質(zhì)粒后悔破壞了四環(huán)素抗性基因（tetr）。

【1】乙型腦炎病毒RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄可得①cDNA；將E蛋白基因和P質(zhì)粒連接需用②限制酶和DNA連接酶。

【2】大腸桿菌屬于原核生物，酵母菌屬于真核生物，由于大腸桿菌沒有膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器，無法對蛋白質(zhì)進(jìn)一步加工，故當(dāng)受體細(xì)胞為大腸桿菌或酵母菌時，所形成的E蛋白結(jié)構(gòu)不完全相同。

【3】DNA疫苗屬于基因，分子較小，結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定，能通過PCR技術(shù)增加生產(chǎn)量，還能通過轉(zhuǎn)錄和翻譯表達(dá)出相應(yīng)的產(chǎn)物，引起免疫反應(yīng)。

【4】P0是載體質(zhì)粒，其含有的氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr）都屬于標(biāo)記基因，可以用檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，表中無抗生素平板培養(yǎng)基的作用是對照作用，另三種培養(yǎng)基屬于屬于選擇培養(yǎng)基。

【5】根據(jù)表格分析，A類菌落在氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基中都能夠生長，說明其導(dǎo)入的是N；B類菌落在氨芐青霉素的培養(yǎng)基中能生長，C類菌落在任何抗生素的培養(yǎng)基中都不能生長，說明其沒有導(dǎo)入任何質(zhì)粒，兩種質(zhì)粒中含有氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr），能表達(dá)產(chǎn)生相應(yīng)的抗生素，但E蛋白基因的表達(dá)與兩種抗生素?zé)o關(guān)。

解答本題的關(guān)鍵是識記并理解基因工程的四個基本步驟，尤其是對核心步驟-構(gòu)建基因表達(dá)載體步驟的理解，明確基因表達(dá)載體的幾個必須的成分及其作用，進(jìn)而結(jié)合題干要求分析答題。