Question

【題目】賴氨酸缺陷型大腸桿菌（）是指經(jīng)過誘變處理后，失去產(chǎn)生賴氨酸能力的大腸桿菌。回答下列問題：

（1）培養(yǎng)基的配置。配置4類培養(yǎng)基：完全培養(yǎng)基、基本培養(yǎng)基、補(bǔ)充賴氨酸的基本培養(yǎng)基（）、無氮基本培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基配制過程中，______（需要/不需要）保持無菌環(huán)境。若需要配制固體無氮培養(yǎng)基，則需在液體無氮培養(yǎng)基中添加______。

（2）菌株的誘變。將野生型大腸桿菌接種在液體完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)6h，目的是進(jìn)行_____。然后將菌液進(jìn)行誘變處理50min，去除誘變劑后，需將菌株轉(zhuǎn)入液體無氨基本培養(yǎng)基培養(yǎng)至菌體數(shù)量不再上升，目的是耗盡菌體中儲(chǔ)存的______。

（3）菌株的篩選。取上述菌懸液，涂布在固體培養(yǎng)基上，待長出菌落后，一一對應(yīng)地接種至固體基本培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，挑取_____的菌落，即為菌株。

（4）菌株的保存。將篩選獲得的株接種于______，4℃下保存。

（5）利用菌株篩選能分泌賴氨酸的益生菌。將菌株與_____培養(yǎng)基混合，制成固體平面培養(yǎng)基，然后將需篩選的益生菌涂布在此平板上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，選取______的菌落即為所需。

Answer 1

【答案】不需要 瓊脂糖 擴(kuò)大培養(yǎng) 氨基酸 在基本培養(yǎng)基上不生長（或生長不佳），而培養(yǎng)基上能生長（良好生長）的 固體斜面培養(yǎng)基 固體基本 周圍長有

【解析】

1、在一般培養(yǎng)溫度下呈固體狀態(tài)的培養(yǎng)基都稱固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入1.5%~2.0%左右的瓊脂，加熱至100℃溶解，40℃下冷卻并凝固，使其成為固體狀態(tài)即為固體培養(yǎng)基。

2、液體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基的對應(yīng)詞，是微生物或動(dòng)植物細(xì)胞的液狀培養(yǎng)基。它具有進(jìn)行通氣培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)。在靜止的條件下，在菌體或培養(yǎng)細(xì)胞的周圍，形成透過養(yǎng)分的壁障，養(yǎng)分的攝入受到阻礙。由于在通氣或在振蕩的條件下，可消除這種阻礙以及增加供氧量，所以有利于細(xì)胞生長，提高生產(chǎn)量。

3、滅菌處理：要獲得微生物純培養(yǎng)，必須避免雜菌污染，因此對所用器材及工作場所進(jìn)行消毒與滅菌。對培養(yǎng)基而言，更是要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌。

（1）在培養(yǎng)基配制過程中，不需要保持無菌環(huán)境，要獲得微生物純培養(yǎng)，必須避免雜菌污染，在配制完成后需對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理。在液體培養(yǎng)基中加入瓊脂，加熱至100℃溶解，40℃下冷卻并凝固，使其成為固體狀態(tài)即為固體培養(yǎng)基。

（2）將野生型大腸桿菌接種在液體完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)6h，由于在通氣或在振蕩的條件下，液體培養(yǎng)可消除養(yǎng)分?jǐn)z入阻礙以及增加供氧量，所以有利于細(xì)胞生長，提高生產(chǎn)量，使菌株得到擴(kuò)大培養(yǎng)。然后將菌液進(jìn)行誘變處理50min，去除誘變劑后，需將菌株轉(zhuǎn)入液體無氨基本培養(yǎng)基培養(yǎng)（即不含氨基酸的培養(yǎng)基)至菌體數(shù)量不再上升，目的是使菌體無法從外界攝入氨基酸，從而耗盡菌體中儲(chǔ)存的氨基酸。

（3）取上述菌懸液，涂布在固體培養(yǎng)基上，待長出菌落后，一一對應(yīng)地接種至固體基本培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，賴氨酸缺陷型大腸桿菌是指失去產(chǎn)生賴氨酸能力的大腸桿菌，在基本培養(yǎng)基上不生長或生長不佳，而培養(yǎng)基上能生長（良好生長），在固體培養(yǎng)基上挑取以上生長情況的菌落，即為菌株。

（4）斜面培養(yǎng)基用于菌種擴(kuò)大轉(zhuǎn)管及菌種保藏，將篩選獲得的株接種于固體斜面培養(yǎng)基，4℃下保存。

（5）將菌株與固體基本培養(yǎng)基混合，制成固體平面培養(yǎng)基，然后將需篩選的益生菌涂布在此平板上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，由于此種益生菌能夠分泌賴氨酸供給菌株，故選取周圍長有的菌落即為所需的能分泌賴氨酸的益生菌。