Question

【題目】回答下列（一）、（二）兩個小題。

（一）脲酶是催化尿素分解的特異性水解酶。該酶主要從刀豆等豆科植物中提取，現(xiàn)被廣泛應用于尿素廢水的凈化過程。請分析回答以下問題：

(1)脲酶可以催化尿素分解為________，其中堿性物質(zhì)可以能使_______指示劑變?yōu)?/span>________。

(2)為了提高脲酶的利用效率，可以采用固定化酶技術(shù)將其固定。酶的固定化方法有：吸附法、交聯(lián)法、包埋法和________。

(3)實驗室中可以采用吸附法將該酶制成固定化酶柱，讓尿素廢水過柱前，先用__________，目的是除去未吸附的游離脲酶。

(4)脲酶除了從植物獲取外，還可以來源于土壤中的微生物。為了從土壤中分離得到以尿素為氮源的微生物，采用的分離方法操作最簡便的是____________。下列有關(guān)該分離方法操作的敘述，錯誤的是________。

A．必須使用固體培養(yǎng)基

B．必須在酒精燈火焰旁接種

C．必須將接種后的培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)

D．必須將接種前的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、土壤懸浮液等進行滅菌處理

(二)如圖表示動物細胞克隆和制備單克隆抗體的相關(guān)過程，請回答下列問題：

(1)過程①常應用________方法導入重組誘導基因后得到干細胞；部分干細胞經(jīng)過誘導可分化成全身的不同組織或器官，說明這些細胞具有________性。

(2)該過程利用了甲細胞具有的________能力，甲和乙細胞可經(jīng)過生物誘導劑____________________的作用形成丙細胞。取一個丙細胞，放在含大量失去________的小鼠成纖維細胞的特定培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，最后產(chǎn)生大量的細胞群，這種方法為________法。

(3)下列關(guān)于經(jīng)③和④過程得到單克隆抗體的敘述，錯誤的是 _________

A．該過程應用了細胞膜具有流動性的原理

B．丙細胞要具有分泌多種抗體的能力

C．該過程應用了動物細胞融合和動物細胞培養(yǎng)技術(shù)

D．丙細胞的形成先通過篩選得到雜交瘤細胞，再進行抗體檢驗

Answer 1

【答案】NH3和CO2 酚紅 紅色 共價偶聯(lián)法 10倍體積的蒸餾水洗滌酶柱 劃線分離法 D 顯微注射 發(fā)育全能 連續(xù)增殖 (滅活的)仙臺病毒 增殖力 克隆培養(yǎng) B

【解析】

（一）1、選擇培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。
2、分解尿素的細菌的鑒定細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細菌，若指示劑變紅，可確定該種細菌能夠分解尿素。
3、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

（二）1、動物細胞培養(yǎng)需要滿足以下條件
（1）充足的營養(yǎng)供給--微量元素、無機鹽、糖類、氨基酸、促生長因子、血清等。
（2）適宜的溫度：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。
（3）無菌、無毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應進行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染。此外，應定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害。
（4）氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2．O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。
2、單克隆抗體的制備過程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（一）（1）脲酶可以催化尿素分解為NH3和C02，其中堿性物質(zhì)可以能使酚紅指示劑變?yōu)榧t色。

（2）酶的固定化方法有：吸附法、共價偶聯(lián)法、包埋法和交聯(lián)法。
（3）實驗室中可以采用吸附法將該酶制成固定化酶柱，讓尿素廢水過柱前，先用10倍體積的蒸餾水洗滌酶柱，目的是除去未吸附的游離脲酶。
（4）分離微生物常用稀釋涂布平板法和平板劃線法，其中平板劃線法是從土壤中分離得到以尿素為氮源的微生物的最簡便的方法．采用平板劃線法時，必須使用固體培養(yǎng)基；為了防止雜菌污染，必須在酒精燈火焰旁接種；配置培養(yǎng)基時，必須將接種后的培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)，防止皿蓋上的水珠滴入培養(yǎng)基污染培養(yǎng)基；必須將接種前的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基等進行滅菌處理，對土壤懸浮液不能進行滅菌處理，否則會殺死目的菌。故選D。

（二）（1）由圖示可知，過程①常應用顯微注射方法導入重組誘導基因后得到干細胞；部分干細胞經(jīng)過誘導可分化成全身的不同組織或器官，說明這些細胞具有發(fā)育全能性。在動物細胞培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液 中必須通入 O2和 CO2，通入 CO2的目的是維持培養(yǎng)液的 pH。
（2）該過程利用了甲細胞具有發(fā)育全能性的能力。制備單克隆抗體過程中，甲和乙細胞可經(jīng)過生物誘導劑滅活的仙臺病毒的作用融合形成丙細胞。取一個丙細胞，放在含大量失去增殖力的小鼠成纖維細胞的特定培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，最后產(chǎn)生大量的細胞群，這種方法為克隆培養(yǎng)法。
（3）該過程中，動物細胞融合應用了細胞膜具有流動性的原理，A正確；丙細胞只具有分泌專一抗體的能力，B錯誤，該過程應用了動物細胞融合和動物細胞培養(yǎng)技術(shù)，C正確；丙細胞的形成先通過篩選得到雜交瘤細胞，再進行專一抗體檢驗，D正確。即關(guān)于經(jīng)③和④過程得到單克隆抗體的敘述，錯誤的是B。