Question

【題目】

（1）①和②過程中所用的限制性內(nèi)切酶分是 、 。

（2）基因表達(dá)載體除了圖示組成外，至少有 等（至少答兩個(gè)）。

（3）③過程中用酶切法可鑒定正、反義表達(dá)載體。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶完全切割正義基因表達(dá)載體獲得0．05kb、3．25kb、5．95kb、9．45kb四種長(zhǎng)度的DNA片段，則用NotⅠ酶切反義基因表達(dá)載體獲得DNA片段的長(zhǎng)度應(yīng)是 和 。

（4）④過程中利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化棉花細(xì)胞的過程中，整合到棉花細(xì)胞染色體DNA的區(qū)段是 ，轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞再通過 形成植物體。

（5）導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對(duì)，從而 （促進(jìn)或抑制）基因的表達(dá)，其意義是 。

Answer 1

【答案】（1）HindⅢ、BamHⅠ SmaⅠ

（2）復(fù)制原點(diǎn)、終止子、標(biāo)記基因等

（3）6．0kb 12．7kb

（4）（含有E6啟動(dòng)子和GhMnaA2基因的）T－DNA 植物組織培養(yǎng)

（5）抑制 阻止β-甘露糖苷酶合成，使棉纖維更長(zhǎng)

【解析】

（1）纖維細(xì)胞E6啟動(dòng)子前后含有限制酶HindⅢ和BamHⅠ的切割位點(diǎn)，因此可以用這兩種酶切割；②是構(gòu)建反義GhMnaA2基因表達(dá)載體的過程，反義GhMnaA2基因前后有限制酶SmaⅠ的切割位點(diǎn)，因此可以該酶切割獲取目的基因。

（2）基因表達(dá)載體由啟動(dòng)子、目的基因、復(fù)制原點(diǎn)、終止子和標(biāo)記基因等部分組成。

（3）③過程中，用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切正義基因表達(dá)載體獲得0．05kb、3．25kb、5．95kb、9．45kb四種長(zhǎng)度的DNA片段，則用NotⅠ酶切反義基因表達(dá)載體獲得DNA片段的長(zhǎng)度應(yīng)是0．05kb+5．95kb=6．0kb、3．25kb+9．45kb=12．7kb。

（4）農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化棉花細(xì)胞的過程中，整合到棉花細(xì)胞染色體DNA的區(qū)段是含有E6啟動(dòng)子和GhMnaA2基因的T-DNA．轉(zhuǎn)化后，還需依據(jù)植物細(xì)胞的全能性，采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將受體細(xì)胞培養(yǎng)形成植物體。

（5）導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對(duì)，從而抑制基因的表達(dá)的翻譯過程，進(jìn)而阻止β-甘露糖苷酶合成，使棉纖維更長(zhǎng)。