Question

【題目】回答下列(一)、(二)小題：

(一)隨著社會的發(fā)展，石油產(chǎn)品的使用越來越多，石油烴污染也越來越嚴重。為了篩選出分解石油烴能力強的微生物，人們不斷地進行研究。下圖為獲取能分離出分解石油烴的微生物的土壤樣品后的研究過程，請回答有關問題：

(1)獲取土壤樣品的取樣地點最好選在____________________。為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，過程①④所用的選擇培養(yǎng)基只能以石油烴作為唯一碳源，其原因是________________。

(2)根據(jù)⑤平板上生長的菌落，對④進行接種采用的方法是____________法，若發(fā)現(xiàn)在⑤中無法區(qū)分菌落，可以將圖中③取出的菌液________________。

(3)純化菌株時，通常使用的劃線工具是__________。采用____________方法對其進行滅菌。劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤是______________________(寫出一點即可)。

(二)毛角蛋白Ⅱ型中間絲(KIFⅡ)基因與絨山羊的羊絨質量密切相關。獲得轉KIFⅡ基因的高絨質絨山羊的簡單流程如圖。

(1)獲取外源基因用到的工具酶是___________________。

(2)在過程②中，用____________酶處理將皮膚組織塊分散成單個成纖維細胞。把一個單細胞從群體中分離出來單獨培養(yǎng)，使之繁衍成一個新的細胞群體的技術，叫細胞克隆。未經(jīng)克隆化的細胞系具有________性。由于人們對動物細胞所需營養(yǎng)物質還沒有完全搞清楚，因此在培養(yǎng)細胞時需在培養(yǎng)基中加入一定量的______________，在培養(yǎng)過程中應將培養(yǎng)瓶置于___________培養(yǎng)。

(3)若要獲得多只相同的轉基因山羊，可對圖中早期胚胎進行____________后進行胚胎移植。

(4)下列有關轉基因山羊培育過程的敘述，錯誤的是________。

A．圖中重組細胞的細胞核來自導入目的基因的細胞

B．重組細胞最初分裂時開始進行DNA復制和基因的轉錄

C．將早期胚胎(如早期囊胚)植入到代孕母羊的輸卵管或子宮角部位

D．如果KIFⅡ基因的序列是已知的，則可用化學方法合成或用聚合酶鏈反應擴增該基因

Answer 1

【答案】 石油烴污染明顯處 只有能利用石油烴的微生物能正常生長繁殖 涂布分離 進行（梯度）稀釋 接種環(huán) 灼燒 接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始劃線 限制性核酸內(nèi)切酶 胰蛋白酶 異質 動物血清 CO2培養(yǎng)箱 胚胎分割 B

【解析】試題分析：

(一）（1）要獲取相應的菌種，應到相應的環(huán)境中獲取，獲取土壤樣品的取樣地點最好選在石油污染明顯處。

（2）常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法。
培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌和消毒方法依次：高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌、化學消毒、紫外線滅菌、巴氏消毒法。
（3）接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，并在培養(yǎng)基表面形成單個細菌繁殖而成的子細胞群體--菌落。

(二）分析題圖：圖示是獲得轉KIFⅡ基因的高絨質絨山羊的簡單流程圖，其中①表示基因表達載體的構建過程，該過程需要限制酶和DNA連接酶；②表示動物細胞培養(yǎng)過程；③表示從成年母絨山羊中獲取卵母細胞

解析：

一、（1）要獲取相應的菌種，應到相應的環(huán)境中獲取，獲取土壤樣品的取樣地點最好選在石油污染明顯處，為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，過程①一④所用培養(yǎng)基，其成分的特點是只含石油烴一種碳源，從而有利于目的菌的生長，抑制其他微生物的生長。

（2）常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，若發(fā)現(xiàn)無法區(qū)分菌落，說明稀釋度不夠，可以將重新進行梯度稀釋。
（3）接種的工具為接種環(huán)；配置好的培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌，在整個微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在無菌條件下進行。接種環(huán)灼燒后未冷卻或劃線未從第一區(qū)域末端開始劃線 ，均會導致 造成劃線無菌落。

二、（1）①表示基因表達載體的構建過程，該過程首先要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，其次還要用DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組DNA分子。
（2）②表示動物細胞培養(yǎng)過程，該過程中要用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）處理將皮膚組織塊，使之分散成單個成纖維細胞。未經(jīng)克隆化的細胞系具有異質性。由于人們對動物細胞所需營養(yǎng)物質還沒有完全搞清楚，因此在培養(yǎng)細胞時需在培養(yǎng)基中加入一定量的動物血清，在培養(yǎng)過程中應將培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)
（3）從重組細胞到早期胚胎需要采用（早期）胚胎培養(yǎng)技術．在胚胎移植前，通過胚胎分割技術可獲得較多胚胎

（4）A.圖中重組細胞的細胞核來自導入目的基因的細胞，A正確；

B.重組細胞最初分裂前就有基因的轉錄，B錯誤；

C.將早期胚胎（如早期囊胚）植入到代孕母羊的輸卵管或子宮角部位，便于早起胚胎的著床，C正確；

D.化學方法合成或用聚合酶鏈式反應擴增可用于獲取已知序列的目的基因，D正確