Question

【題目】地中海貧血癥是一種在我國(guó)長(zhǎng)江以南各省高發(fā)的單基因遺傳病，發(fā)病原因是由于珠蛋白合成異常導(dǎo)致紅細(xì)胞易破裂發(fā)生溶血。

（1）某地區(qū)的地中海貧血癥患者的β珠蛋白基因出現(xiàn)圖1所示變化，該突變將導(dǎo)致______，使其無(wú)法與α珠蛋白結(jié)合，導(dǎo)致α珠蛋白在細(xì)胞中相對(duì)過(guò)剩，沉積在紅細(xì)胞中造成細(xì)胞被破壞，因而出現(xiàn)貧血病癥。

（2）地中海貧血癥患者除了需要輸血緩解癥狀之外，常見(jiàn)的治療手段是進(jìn)行異體骨髓移植，它的局限性主要是_________。目前利用生物工程技術(shù)將患者的體細(xì)胞轉(zhuǎn)化為多能干細(xì)胞，以獲得用于自體移植的細(xì)胞。

（3）研究者利用慢病毒載體建立相應(yīng)轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，對(duì)上述多能干細(xì)胞進(jìn)行基因修復(fù)。具體操作過(guò)程如圖2所示。

①I：表達(dá)載體含HIV病毒逆轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段，該片段幫助外源基因整合到_______上，使外源基因穩(wěn)定表達(dá)。為達(dá)到糾正患者α珠蛋白與β珠蛋白的比例異常的問(wèn)題，需要構(gòu)建兩種表達(dá)載體，分別以_______和α珠蛋白干擾基因作為目的基因。

②II：需要將________（選擇下列序號(hào)填寫）導(dǎo)入包裝細(xì)胞，一段時(shí)間后可以獲得能夠轉(zhuǎn)化患者多能干細(xì)胞的慢病毒顆粒。

a.包裝載體 b.表達(dá)載體

③III：為了便于篩選出成功轉(zhuǎn)化的多能干細(xì)胞，其中________（選擇下列序號(hào)填寫）含有易檢測(cè)的標(biāo)記基因。

a.包裝載體 b.表達(dá)載體

（4）理論上在獲得成功轉(zhuǎn)化的多能干細(xì)胞后，需要誘導(dǎo)其定向分化為_________，然后植入患者骨髓，檢測(cè)_________以確認(rèn)此技術(shù)可應(yīng)用于地中海貧血癥的治療。

（5）本項(xiàng)研究目前僅在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中完成，尚未進(jìn)行人體臨床實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)分析整個(gè)研究過(guò)程，你認(rèn)為進(jìn)行人體臨床試驗(yàn)可能存在的風(fēng)險(xiǎn)有哪些？請(qǐng)寫出其中1個(gè)風(fēng)險(xiǎn)。_________

Answer 1

【答案】β珠蛋白空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化 發(fā)生免疫排斥 宿主細(xì)胞（受體細(xì)胞、干細(xì)胞）染色體DNA 正常的β珠蛋白基因 ab b 造血干細(xì)胞 α珠蛋白與β珠蛋白的比例 慢病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞時(shí)可能引起影響宿主正常基因功能；經(jīng)過(guò)基因修復(fù)的多能干細(xì)胞有癌變可能；病毒的部分序列表達(dá)產(chǎn)物或經(jīng)過(guò)改造的多能干細(xì)胞都可能引發(fā)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)

【解析】

本題是對(duì)基因突變、基因轉(zhuǎn)錄、基因工程、器官移植等知識(shí)的綜合考查，回憶基因突變的概念，逆轉(zhuǎn)錄的過(guò)程、基因表達(dá)載體的構(gòu)建以及動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程，然后分析題干和題圖獲取有效信息，根據(jù)相關(guān)知識(shí)點(diǎn)和相關(guān)信息解答問(wèn)題。

（1）由圖1 可知，地中海貧血患者β珠蛋白基因發(fā)生了堿基對(duì)的缺失，導(dǎo)致β珠蛋白基因結(jié)構(gòu)改變進(jìn)而導(dǎo)致編碼的β珠蛋白空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，使其無(wú)法與α珠蛋白結(jié)合。

（2）器官移植最大的局限是有免疫排斥現(xiàn)象。

（3）①cDNA片段能夠幫助外源基因整合到宿主細(xì)胞染色體的DNA上，使外源基因得以穩(wěn)定的表達(dá)。依據(jù)題干信息，應(yīng)以正常的β珠蛋白基因和α珠蛋白干擾基因作為目的基因，以糾正患者α珠蛋白與β珠蛋白的比例異常的問(wèn)題。

②依據(jù)操作第二步慢病毒的包裝顯示，需將包裝載體和表達(dá)載體共同導(dǎo)入包裝細(xì)胞。

③表達(dá)載體上還有標(biāo)記基因。

（4）骨髓中的多能干細(xì)胞——造血干細(xì)胞可以不斷的分裂分化出紅細(xì)胞，因此需要將成功轉(zhuǎn)化的多能干細(xì)胞后誘導(dǎo)分化為造血干細(xì)胞后植入患者骨髓，再檢測(cè)α珠蛋白與β珠蛋白的比例，以確認(rèn)能否應(yīng)用于地中海貧血癥的治療。

（5）科研實(shí)驗(yàn)往往先進(jìn)性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，再進(jìn)行臨床試驗(yàn)，而且依然存在諸多風(fēng)險(xiǎn)，比如慢病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞時(shí)可能引起影響宿主正�；�因功能；經(jīng)過(guò)基因修復(fù)的多能干細(xì)胞有癌變可能；病毒的部分序列表達(dá)產(chǎn)物或經(jīng)過(guò)改造的多能干細(xì)胞都可能引發(fā)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)等等。