Question

【題目】下圖甲表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度(bp即堿基對(duì))和部分堿基序列，圖乙表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列�，F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。

【1】DNA分子中磷酸和脫氧核糖之間的化學(xué)鍵叫做磷酸二酯鍵，下列酶中能作用于磷酸二酯鍵的是（ ）

A. DNA解旋酶 B. DNA聚合酶 C. DNA連接酶 D. 限制性內(nèi)切酶

【2】寫(xiě)出BamHⅠ酶切后形成的粘性末端（寫(xiě)出一個(gè)）_____________；如果用限制酶SmaⅠ完全切割圖甲所示的DNA片段，則產(chǎn)物中DNA片段長(zhǎng)度分別為_____________________。

【3】在基因工程中通常選擇質(zhì)粒作為目的基因的運(yùn)載體，原因是__________________；為了將圖甲所示的目的基因D導(dǎo)入圖乙所示的質(zhì)粒，應(yīng)選擇的限制酶是__________。

【4】成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌具有的特點(diǎn)是（ ）（多選）

A. 能在含有抗生素A的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)

B. 能在含有抗生素B的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)

C. 在含有抗生素A的培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)

D. 在含有抗生素B的培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)

【5】為了獲得含重組質(zhì)粒的單個(gè)大腸桿菌的菌落，常用的接種方法是________________。

Answer 1

【答案】

【1】BCD

【2】103bp、153 bp、194 bp

【3】質(zhì)粒能在受體細(xì)胞中獨(dú)立遺傳并能表達(dá)；質(zhì)粒上有很多限制酶切割位點(diǎn)和標(biāo)記基因，便于對(duì)其進(jìn)行酶切操作和連接成功后的篩選BamHⅠ酶

【4】BC

【5】平板劃線法

【解析】試題分析：本題以圖文結(jié)合的形式綜合考查了基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生分析題圖獲取有效信息的能力；能理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力。解答本題要求學(xué)生識(shí)記基因工程的原理、操作工具及操作步驟等，掌握各步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確判斷各選項(xiàng)。分析圖甲：圖中DNA片段含有2個(gè)限制酶SmaⅠ切割位點(diǎn)，可被限制酶SmaⅠ切割產(chǎn)生三種DNA片段�；�因D兩側(cè)序列為GGATCC，可被限制酶BamHⅠ切割。據(jù)圖甲、乙可知目的基因要完全切割下來(lái)可以用BamHI酶，用MboI酶也可以，同樣質(zhì)粒上也都有該酶切位點(diǎn)，但用MboI酶切后會(huì)將質(zhì)粒上的2個(gè)抗性基因都破壞掉無(wú)法進(jìn)行篩選，用BamHI酶切后質(zhì)粒的抗生素A基因被破壞，故只能用含抗生素B的培養(yǎng)基鑒定。

【1】限制性核酸內(nèi)切酶斷開(kāi)磷酸二酯鍵，DNA連接酶、DNA聚合酶催化磷酸二酯鍵的形成；解旋酶斷開(kāi)堿基對(duì)之間的氫鍵。故選：BCD。

【2】據(jù)圖可知，BamHⅠ酶切位點(diǎn)為G↓GATCC，因此BamHⅠ酶切后形成的粘性末端。據(jù)圖可知，圖中DNA片段含有2個(gè)限制酶SmaⅠ切割位點(diǎn)，可被限制酶SmaⅠ切割產(chǎn)生長(zhǎng)度為150+3=153bp、200-3-3=194bp、100+3=103bp的三種DNA片段。

【3】由于質(zhì)粒能在受體細(xì)胞中獨(dú)立遺傳并能表達(dá)；質(zhì)粒上有很多限制酶切割位點(diǎn)和標(biāo)記基因，便于對(duì)其進(jìn)行酶切操作和連接成功后的篩選，因此在基因工程中，通常選擇質(zhì)粒作為目的基因的運(yùn)載體。由圖甲可知，目的基因兩側(cè)是GGATCC序列，該序列是限制酶BamHⅠ的識(shí)別序列，因此要將質(zhì)粒和目的基因D連接形成重組質(zhì)粒，應(yīng)選用限制酶BamHⅠ切割。

【4】用限制酶BamHⅠ切割破壞了抗生素A抗性基因，但沒(méi)有破環(huán)抗生素B抗性基因，因此含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌能抗抗生素B，但不能抗抗生素A。故選：BC。

【5】為了獲得含重組質(zhì)粒的單個(gè)大腸桿菌的菌落，常用的接種方法是平板劃線法。