Question

【題目】科研人員采用轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因綿羊，以便通過乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人 凝血因子IX醫(yī)用蛋白，其技術(shù)路線如圖。

(1)要想目的基因只在乳腺組織中表達(dá)，在構(gòu)建基因表達(dá)載體A 時(shí),需要將_________基因和__________等調(diào)控組件重組在一起。

(2)將A導(dǎo)入綿羊胎兒成纖維細(xì)胞中常用的方法是__________。將 A 導(dǎo)入受精卵能否獲得轉(zhuǎn)基因綿羊？ ______ ，判斷依據(jù)是________________.

(3)核移植的受體應(yīng)選用__________期卵母細(xì)胞?。

(4)移植應(yīng)選擇胚胎發(fā)育到________階段時(shí)進(jìn)行;轉(zhuǎn)基因綿羊的性狀基本上與代孕母羊無關(guān)的原因是__________.

Answer 1

【答案】人凝血因子IX 乳腺組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子 顯微注射法 能 因?yàn)槭芫�卵具有發(fā)育全能性，將受精卵體外培養(yǎng)成早期胚胎再胚胎移植就可獲得轉(zhuǎn)基因綿羊 MⅡ中 桑椹胚或囊胚 胚胎的遺傳性狀基本不受受體任何影響

【解析】

DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體。

目的基因分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。

該基因工程需要對(duì)羊的性別進(jìn)行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進(jìn)行移植。

(1) ①過程構(gòu)建的A是含目的基因的（基因）表達(dá)載體。它必須將目的基因人凝血因子IX與乳（腺）蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，才能通過分泌乳汁來生產(chǎn)人凝血因子IX醫(yī)用蛋白。

(2) 將A導(dǎo)入綿羊胎兒成纖維細(xì)胞中常用的方法是顯微注射法。因?yàn)槭芫�卵具有發(fā)育全能性，將受精卵體外培養(yǎng)成早期胚胎再胚胎移植就可獲得轉(zhuǎn)基因綿羊。

(3) 在核移植之前，必須先去掉受體卵細(xì)胞的核，目的是保證核遺傳物質(zhì)來自含目的基因的成纖維細(xì)胞，核移植的受體應(yīng)選用處于MⅡ中期的卵母細(xì)胞。

(4) 移植應(yīng)選擇胚胎發(fā)育到桑椹胚或囊胚階段時(shí)進(jìn)行；代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。轉(zhuǎn)基因綿羊的細(xì)胞核來源于供核母羊，因此轉(zhuǎn)基因綿羊的性狀與供核母羊最相似，基本上與代孕母羊無關(guān)。