Question

2．(2012·天津理綜)黃曲霉毒素B₁(AFB₁)存在于被黃曲霉菌污染的飼料中，它可以通過(guò)食物鏈進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)并蓄積，引起癌變。某些微生物能表達(dá)AFB₁解毒酶，將該酶添加在飲料中可以降解AFB₁，清除其毒性�；卮鹣铝袉�(wèn)題：

(1)AFB₁屬于________類致癌因子。

(2)AFB₁能結(jié)合在DNA的G上，使該位點(diǎn)受損傷變?yōu)镚^*，在DNA復(fù)制中，G^*會(huì)與A配對(duì)。現(xiàn)有受損傷部位的序列為，經(jīng)兩次復(fù)制后，該序列突變?yōu)開_______。

(3)下圖為采用基因工程技術(shù)生產(chǎn)AFB₁解毒酶的流程圖。

據(jù)圖回答問(wèn)題：

①在甲、乙條件下培養(yǎng)含AFB₁解毒酶基因的菌株，經(jīng)測(cè)定，甲菌液細(xì)胞密度小、細(xì)胞含解毒酶；乙菌液細(xì)胞密度大、細(xì)胞不含解毒酶。過(guò)程Ⅰ應(yīng)選擇________菌液的細(xì)胞提取總RNA，理由是_____________________________________________________________。

②過(guò)程Ⅱ中，與引物結(jié)合的模板是____________________________________________________________。

③檢測(cè)酵母工程菌是否合成了AFB₁解毒酶，應(yīng)采用________方法。

(4)選取不含AFB₁的飼料和某種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為材料，探究該AFB₁解毒酶在飼料中的解毒效果。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及測(cè)定結(jié)果見下表。

組別	添加		肝臟AFB1殘留量(ng/g)
	AFB1 (μg/kg飼料)	AFB1解毒酶(g/kg飼料)
A	0	0	6.4
B	100	0	20.9
C	100	1	16.8
D	100	3	11.7
E	100	5	7.3
F	100	7	7.3

據(jù)表回答問(wèn)題：

①本實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)自變量分別為_____________________________。

②本實(shí)驗(yàn)中，反映AFB₁解毒酶解毒效果的對(duì)照組是________。

③經(jīng)測(cè)定，某污染飼料中AFB₁含量為100 μg/kg，則每千克飼料應(yīng)添加________克AFB₁解毒酶，解毒效果最好，同時(shí)節(jié)約了成本。

(5)采用蛋白質(zhì)工程進(jìn)一步改造該酶的基本途徑是：從提高酶的活性出發(fā)，設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對(duì)應(yīng)的________序列。

Answer 1

答案：(1)化學(xué)    (2)—ATT—,—TAA—)    (3)①甲　甲菌液細(xì)胞的AFB₁解毒酶基因已轉(zhuǎn)錄生成mRNA，而在乙菌液細(xì)胞中該基因未轉(zhuǎn)錄　②AFB₁解毒酶基因的cDNA�、劭乖�—抗體雜交   (4)①AFB₁的添加量和AFB₁解毒酶的添加量　②B組(或B組＋A組)�、�5    (5)脫氧核苷酸

解析：本題考查考生對(duì)DNA的復(fù)制、基因工程相關(guān)知識(shí)的掌握情況，重點(diǎn)考查考生的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)分析能力，難度較大。(1)黃曲霉毒素屬于化學(xué)致癌因子。(2)分析題意：AFB₁能使DNA中的G突變?yōu)镚^*，G^*與A配對(duì)，受損傷部位序列為—AG^*T—，其互補(bǔ)鏈為—TAA—，即雙鏈DNA的—AG*T—,—T C A—)突變后序列變?yōu)椤狝TT—,—TAA—)，復(fù)制兩次后仍為—ATT—,—TAA—)。(3)分析采用基因工程技術(shù)生產(chǎn)AFB₁解毒酶的流程圖，可知獲取目的基因的方法為反轉(zhuǎn)錄法，因此從細(xì)胞中提取的總RNA中，必須含有AFB₁解毒酶基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA，因此選擇甲菌液獲取RNA；乙菌液細(xì)胞中雖然含有AFB₁解毒酶基因，但細(xì)胞不含解毒酶，可能是該基因未發(fā)生轉(zhuǎn)錄；PCR擴(kuò)增的目的基因即AFB₁解毒酶基因的cDNA；從分子水平上檢測(cè)工程菌是否合成了AFB₁解毒酶，應(yīng)采用抗原—抗體雜交技術(shù)。(4)根據(jù)對(duì)照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則分析：A組與B組比較，自變量為AFB₁的添加量；B組與F組比較，自變量為AFB₁解毒酶的添加量，反映解毒酶效果的對(duì)照組應(yīng)為B組(或A＋B組)。分析數(shù)據(jù)得出：E組、F組解毒效果最好，為了節(jié)約成本，每千克飼料添加5 g AFB₁解毒酶最適宜。(5)蛋白質(zhì)工程是從蛋白質(zhì)的功能出發(fā)，推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列，然后找到相應(yīng)的脫氧核苷酸序列，最后通過(guò)基因修飾或基因合成達(dá)到目的。