Question

【題目】如圖所示，若用兩種識(shí)別切割序列完全不同的限制酶E和F從基因組DNA上切下目的基因，并將之取代質(zhì)粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000對(duì)堿基)上相應(yīng)的E—F區(qū)域(0.2kb)。

____

（1）已知在質(zhì)粒pZHZl中，限制酶G切割位點(diǎn)距限制酶E切割位點(diǎn)0．8kb，限制酶H切割位點(diǎn)距限制酶F切割位點(diǎn)O．5kb。若分別用限制酶G和H酶切兩份重組質(zhì)粒pZHZ2樣品，據(jù)表所列為酶切結(jié)果。請(qǐng)將目的基因內(nèi)部的限制酶G和H切割位點(diǎn)標(biāo)注在下圖中。

（2）若想在大腸桿菌中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，則需將重組質(zhì)粒pZHZ2導(dǎo)入感受態(tài)細(xì)胞，感受態(tài)細(xì)胞的含義是______。目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是______。

（3）PCR技術(shù)DNA合成的方向總是從子鏈的_____延伸。PCR的每次循環(huán)分為_____三步。

Answer 1

【答案】 細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài) 轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因 5'端向3'端延伸 變性→復(fù)性→延伸

【解析】試題分析：本題以圖文結(jié)合的形式綜合考查學(xué)生對(duì)基因工程的知識(shí)的識(shí)記和理解能力。解答本題需熟記并理解基因工程的基本操作程序并形成清晰的知識(shí)網(wǎng)絡(luò)。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合問題情境，從題圖和題意中提取有效信息，進(jìn)行相關(guān)問題的解答。

(1) 依題意和表中信息可知：質(zhì)粒pZHZ1長度為3.7kb，切去EF之間的片段（0.2kb）還剩3.5kb，含有1個(gè)限制酶G切割位點(diǎn)和1個(gè)限制酶H切割位點(diǎn)，限制酶G切割位點(diǎn)距限制酶E切割位點(diǎn)0.8kb，限制酶H切割位點(diǎn)距限制酶F切割位點(diǎn)O.5kb。分別用限制酶G和H酶切兩份重組質(zhì)粒pZHZ2，得到兩種長度的片段，說明重組質(zhì)粒pZHZ2的長度為1.6＋3.1＝4.7 kb，且含有2個(gè)限制酶G切割位點(diǎn)和2個(gè)限制酶H切割位點(diǎn)，因此目的基因長度為4.7－3.5＝1.2kb，目的基因中也有1個(gè)限制酶G切割位點(diǎn)和1個(gè)限制酶H切割位點(diǎn)。用限制酶G切重組質(zhì)粒pZHZ2，得到1.6 kb和3.1 kb兩種片段，說明目的基因內(nèi)部的限制酶G切割位點(diǎn)距原有的限制酶E切割位點(diǎn)1.6－0.8＝0.8kb；用限制酶H切重組質(zhì)粒pZHZ2，得到1.2kb和3.15kb兩種片段，說明目的基因內(nèi)部的限制酶H切割位點(diǎn)距原有的限制酶F切割位點(diǎn)1.2－0.5＝0.7kb。標(biāo)注的示意圖見答案。

(2) 感受態(tài)細(xì)胞的含義是：細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是：轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因。

(3) PCR技術(shù)DNA合成的方向總是從子鏈的5'端向3'端延伸；PCR的每次循環(huán)分為三步：變性→復(fù)性→延伸。