Question

【題目】多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果膠使細(xì)胞壁破損．成熟的番茄果實(shí)中，PG合成顯著增加，能使果實(shí)變紅變軟，但不利于保鮮．利用基因工程減少PG基因的表達(dá)，可延長果實(shí)保質(zhì)期．科學(xué)家將PG基因反向接到Ti質(zhì)粒上，導(dǎo)入番茄細(xì)胞中，得到轉(zhuǎn)基因番茄，具體操作流程如圖．據(jù)圖回答下列問題：
（1）若已獲取PG的mRNA，可通過方法獲取PG基因．PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是 ， 以便根據(jù)這一序列合成引物．
（2）該質(zhì)粒含14000堿基對（14kb），若同時(shí)使用兩種限制酶切割，產(chǎn)生的片段有5kb、7.5kb、1.5kb，則只用限制酶BamHⅠ切割時(shí)產(chǎn)生的片段長度分別是和 ．
（3）用含目的基因的農(nóng)桿菌感染番茄原生質(zhì)體后，可用含有的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選．如果想通過實(shí)驗(yàn)鑒別細(xì)胞壁是否再生，可將其置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的蔗糖溶液中，觀察細(xì)胞現(xiàn)象進(jìn)行判斷．
（4）由于導(dǎo)入的目的基因能轉(zhuǎn)錄出反義RNA，且能與互補(bǔ)結(jié)合，因此可抑制PG基因的正常表達(dá)，使番茄果實(shí)的保質(zhì)期延長．

Answer 1

【答案】
（1）逆轉(zhuǎn)錄法；有一段已知目的基因的核苷酸序列
（2）7.5kb；6.5kb
（3）卡那霉素；是否發(fā)生質(zhì)壁分離
（4）天然的PG基因轉(zhuǎn)錄的mRNA（正常的mRNA）
【解析】解：（1）若已獲取PG的mRNA，可通過逆轉(zhuǎn)錄法獲取PG基因．PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物．（2）該質(zhì)粒含14000堿基對（14kb），若同時(shí)使用兩種限制酶切割，產(chǎn)生的片段有5kb、7.5kb、1.5kb，則只用限制酶BamHⅠ切割時(shí)產(chǎn)生的片段長度分別是7.5kb和5+1.5=6.5kb．（3）由圖可知，重組質(zhì)粒中含卡那霉素抗性基因而四環(huán)素抗性基因被破壞，因此用含目的基因的農(nóng)桿菌感染番茄原生質(zhì)體后，可用含有卡那霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選．之后，還需將其置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3g/ml的蔗糖溶液中，觀察細(xì)胞細(xì)胞是否發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象來鑒別細(xì)胞壁是否再生．（4）由于導(dǎo)入的目的基因能轉(zhuǎn)錄出反義RNA，且能與天然的PG基因轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，因此可抑制PG基因的正常表達(dá)． 所以答案是：（1）逆轉(zhuǎn)錄法；有一段已知目的基因的核苷酸序列；（2）7.5kb；6.5kb；（3）卡那霉素；是否發(fā)生質(zhì)壁分離；（4）天然的PG基因轉(zhuǎn)錄的mRNA（正常的mRNA）
【考點(diǎn)精析】根據(jù)題目的已知條件，利用基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識(shí)可以得到問題的答案，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．