Question

【題目】硝基苯酚是工業(yè)污水中重要污染物，某同學欲從污水處理廠污泥中分離分解硝基苯酚的細菌。請回答下列有關(guān)問題：

（1）為了篩選污泥中可分解硝基苯酚的細菌，在配制培養(yǎng)基時應選擇________ (硝基苯酚，硝基苯酚+牛肉膏，硝基苯酚十葡萄糖）作為唯一碳源，檢測培養(yǎng)基滅菌是否合格的方法是_______________________________ 。

（2）純化菌株時，通常使用的劃線工具是________ 。常用________法進行活菌計數(shù)，1g樣品被稀釋106倍后，每個嚴格滅菌的培養(yǎng)皿中用了0.5ml稀釋液，所得的菌落數(shù)分別為112、132、141、130、140，則每克樣品中的菌落數(shù)為______個，但統(tǒng)計的菌落數(shù)往往_______（填“多于”或“少于”)稀釋液中的活菌數(shù)，原因是_________________________。

（3）為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力________。篩選出的優(yōu)良菌種可以用________法長期保存。

Answer 1

【答案】硝基苯酚 取若干滅菌后未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，觀察是否有菌落生長 接種環(huán) 稀釋涂布平板法 2.62108 少于 當2個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落 強 甘油管藏法

【解析】

1、本實驗目的是分離分解硝基苯酚的細菌，因此應當配制以硝基苯酚為唯一氮源和碳源的培養(yǎng)基；微生物的培養(yǎng)過程中，常用來分離微生物的方法是稀釋涂布平板法和平板劃線分離法；進行平板劃線操作時，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)內(nèi)劃線，重復以上操作，在第三四五區(qū)內(nèi)劃線，注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連；稀釋涂布平板法常用來進行微生物的計數(shù)，其原理是培養(yǎng)基表面的一個菌落來源于（稀釋液中的）一個活菌，由于菌落可能是由兩個或多個細胞形成，所以統(tǒng)計的菌落數(shù)往往少于稀釋液中的活菌數(shù)。

2、菌種保藏的方法：（1）斜面低溫保藏法：將菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，待菌種生長完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定時間（保藏期）再轉(zhuǎn)接至新的斜面培養(yǎng)基上，生長后繼續(xù)保藏，如此連續(xù)不斷。此法廣泛適用于細菌、放線菌、酵母菌和霉菌等大多數(shù)微生物菌種的短期保藏及不宜用冷凍干燥保藏的菌種:；（2）甘油管藏法，適合長時間保藏菌種。

（1）為了篩選污泥中可分解硝基苯酚的細菌，在配置培養(yǎng)基時應選擇硝基苯酚作為碳源，保證硝基苯酚是唯一碳源和氮源。檢測培養(yǎng)基滅菌是否合格，可以取若干滅菌后未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，觀察是否有菌落生長，若無菌落生長則是合格的。

（2）利用劃線分離法純化菌株時使用的劃線工具是接種環(huán)；稀釋涂布平板法常用來進行微生物的計數(shù)，由于菌落可能是由兩個或多個細胞形成或者操作時有些活菌在培養(yǎng)過程中死亡，所以統(tǒng)計的菌落數(shù)往往少于稀釋液中的活菌數(shù)。根據(jù)題意，1g樣品被稀釋106倍后，每個嚴格滅菌的培養(yǎng)皿中用了0.5ml稀釋液，所得的菌落數(shù)分別為112、132、141、130、140，則菌落數(shù)平均為（112+132+141+130+140）÷5=131，則每克樣品中的菌落數(shù)為1÷0.5×131×106=2.62108。

（3）菌株降解硝基苯酚的能力越強，單菌落周圍分解圈越大。篩選出的優(yōu)良菌種可以用甘油管藏法進行長期保存。