Question

【題目】CAR-T細胞療法是通過設計CAR基因，并導入癌癥患者的T細胞中，使其轉化為CAR-T細胞，CAR-T細胞膜上的CAR蛋白與癌細胞表面抗原特異結合后，激活CAR-T細胞使其增殖、分化，從而實現(xiàn)對癌細胞的特異性殺傷和記憶，主要過程如下圖。請回答：

（1）要獲取CAR基因，可采取PCR技術進行大量擴增，其原理是___________________。

（2）將CAR基因導入患者T細胞前，需完成過程①，該過程所需要的酶有__________，連接形成pCDH—CAR上除了目的基因外，還有一些必須的部分，比如__________，它可使轉錄在需要的地方停止下來。

（3）完成過程②的常用方法是__________法，受體細胞是__________。

（4）檢測CAR-T細胞能夠產(chǎn)生CAR蛋白所采取的方法是__________。

（5）構建好的CAR-T細胞還需要再體外進行擴增，擴增時需要定期更換培養(yǎng)液，這樣做的目的是______________________________。

Answer 1

【答案】DNA雙鏈的復制 限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶 終止子 顯微注射法 患者的T細胞 抗原—抗體分子雜交 清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成傷害

【解析】

基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）PCR技術又叫DNA的體外擴增技術，其原理是DNA雙鏈的復制。

（2）過程①表示基因表達載體的構建，該過程需要限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶，連接形成基因表達載體pCDH—CAR上除了目的基因外，還有啟動子、終止子、標記基因等，其中終止子可使轉錄在需要的地方停止下來。

（3）過程②表示導入受體細胞，由圖可知，其受體細胞是患者的T細胞，導入動物細胞常用方法是顯微注射法。

（4）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)所采取的方法是抗原—抗體分子雜交。

（5）構建好的CAR-T細胞擴增時需要定期更換培養(yǎng)液，這樣做的目的是清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成傷害。