Question

【題目】現(xiàn)代生物科技中篩選是一個重要過程。請回答下列技術(shù)有關(guān)篩選問題：

（1）過程③是雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，在體外培養(yǎng)時培養(yǎng)基中需要提供一定濃度的CO2，目的是_______。雜交瘤細(xì)胞需要經(jīng)過兩次篩選，第一次篩選的目的是_________。

（2）過程②誘導(dǎo)融合運用的原理是_______，該過程中區(qū)別于植物原聲質(zhì)體融合的方法是用________

處理。植物原生質(zhì)體融合后，需從_______種兩兩融合的細(xì)胞中篩選出雜種細(xì)胞的原聲質(zhì)體。

（3）研究人員采用PCR技術(shù)獲取酶D基因和轉(zhuǎn)運肽基因，該技術(shù)是利用________ 的原理，使相應(yīng)基因呈指數(shù)增加。所含三種限制酶（XbaⅠ、ClaⅠ、SacⅠ）的切點如圖所示，則用______和________處理兩個基因后，可得到酶D基因和轉(zhuǎn)運肽基因的重組基因，選用這兩種酶的原因是_________。

Answer 1

【答案】維持培養(yǎng)液的pH 獲得雜交瘤細(xì)胞 細(xì)胞膜的流動性 滅活的病毒 3 DNA雙鏈復(fù)制 ClaⅠ DNA連接酶 需要重組的兩個基因都具有ClaⅠ切割位點，兩個基因重組需要DNA連接酶鏈接

【解析】

1.單克隆抗體的制備是將骨髓瘤細(xì)胞與漿細(xì)胞結(jié)合，經(jīng)過選擇培養(yǎng)基的篩選得到雜交瘤細(xì)胞并經(jīng)專一抗體檢測后，培養(yǎng)能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞即可得單克隆抗體，涉及動物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞融合技術(shù)；雜交瘤細(xì)胞集合了兩個細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，但不一定全部表達(dá)；單克隆抗體最廣泛的用途是用作體外診斷試劑，具有準(zhǔn)確、快速等優(yōu)點。

2.基因文庫包括cDNA文庫、基因組文庫等．某個群體包含一種生物所有的基因的文庫叫基因組文庫，而用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA片段屬于cDNA文庫。

3.限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．同種限制酶切割能夠產(chǎn)生相同的黏性末端，便于質(zhì)粒和目的基因連接。

（1）動物細(xì)胞培養(yǎng)時需要加入一定量的二氧化碳，其作用是維持培養(yǎng)液的pH值。雜交瘤細(xì)胞需要經(jīng)過兩次篩選，第一次篩選的目的是利用選擇培養(yǎng)基將融合后的雜交瘤細(xì)胞選擇出來。

（2）圖中過程②誘導(dǎo)動物融合運用的原理是細(xì)胞膜的流動性，誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合采用的方法包括：物理法、化學(xué)法和生物法，其不同于植物原生質(zhì)體融合的方法是利用滅活的病毒介導(dǎo)動物細(xì)胞融合。植物原生質(zhì)體融合后，如果考慮兩兩融合有三種情況，即同種細(xì)胞原生質(zhì)體融合和雜種細(xì)胞原生質(zhì)體間的融合，經(jīng)過選擇培養(yǎng)從中選擇出雜種原生質(zhì)體。

（3）PCR技術(shù)采用體外DNA雙鏈復(fù)制的原理，使相應(yīng)基因呈指數(shù)增加。分析轉(zhuǎn)運肽基因和酶D基因的限制酶切點可知，兩個片段同時具有ClaⅠ限制酶切割位點，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到相連的重組基因。