Question

【題目】苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對環(huán)境有嚴(yán)重危害．小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)圖1操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株．請回答下列問題：

（1）酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有 ______．

（2）將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸 ______．以達(dá)到富集酚降解菌的目的．若圖1平板中菌落過于密集，應(yīng)進一步 ______ ，以便于菌落計數(shù)與分離．制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加 ______ ．

（3）圖2為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中 ______ （填圖中序號）區(qū)域更易獲得單菌落．

（4）采用比色測定法（使用苯酚顯色劑）檢測降解后的廢水中苯酚殘留量．先制作系列濃度梯度并進行顯色反應(yīng)，下表中1～5號比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為 ______ ．

管號	1	2	3	4	5	6
苯酚濃度（mg/L）						1

如果廢水為50mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋 ______ （填序號：①5②10③20）倍后，再進行比色．

Answer 1

【答案】蛋白胨、苯酚 增加 稀釋涂布 凝固劑 ③ 0、0.2、0.4、0.6、0.8 ③

【解析】

微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求．對異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時并不是起單一方面的作用。微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

（1）培養(yǎng)基成分中的有機物均可以提供碳源，即蛋白胨、苯酚也可以作為碳源。

（2）分析實驗可知，實驗?zāi)康氖呛Y選酚降解菌，因此將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸增加，以達(dá)到富集苯酚降解菌的目的。若圖1平板中菌落過于密集，應(yīng)進一步稀釋涂布，以便于菌落計數(shù)與分離。平板培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基需要加入瓊脂作為凝固劑。

（3）圖2為平板劃線法，隨著劃線次數(shù)的增加，菌種進一步被稀釋，因此圖中③區(qū)域更易獲得單菌落。

（4）進行實驗時，首先需要設(shè)置濃度為0的苯酚作為空白對照組，并且6號試管苯酚濃度為1，由此可見，濃度梯度應(yīng)該為0.2，即表中1～5號比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為0、0.2、0.4、0.6、0.8．如果廢水為50mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，即殘留液中苯酚濃度約為10mg/L，與以上6支試管中的濃度相比，需要將殘留液稀釋20倍后，再進行比色。