Question

【題目】根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下列問題：

（1）限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有____________和____________。

（2）質(zhì)粒運載體用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如下：

為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性核酸內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點是____________。

（3）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即____________DNA連接酶和____________DNA連接酶。

（4）反轉(zhuǎn)錄作用的產(chǎn)物是____________。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用____________技術(shù)。

（5）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是________________________。

Answer 1

【答案】 黏性末端 平末端 切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的相同 大腸桿菌 T4 cDNA(或DNA) PCR 未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱

【解析】試題分析：本題以圖文結(jié)合的形式綜合考查學生對基因工程的知識的識記和理解能力。解答本題需熟記并理解DNA重組技術(shù)的基本工具、基因工程的基本操作程序并形成清晰的知識網(wǎng)絡(luò)。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合問題情境，從題意中提取有效信息進行相關(guān)問題的解答。

(1)限制性核酸內(nèi)切酶（簡稱限制酶）切割DNA分子后，產(chǎn)生的片段末端類型有黏性末端和平末端。

(2)目的基因與運載體具有相同的黏性末端才能連接，若用包括EcoRⅠ在內(nèi)的兩種限制酶切割目的基因，則另一種限制酶必須具有的特點是：切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的相同。

(3)按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即大腸桿菌DNA連接酶和T4 DNA連接酶。

(4)反轉(zhuǎn)錄的實質(zhì)是以mRNA為模板合成DNA的過程，因此反轉(zhuǎn)錄作用的產(chǎn)物是cDNA(或DNA)。得到DNA可在體外，采用PCR技術(shù)進行大量擴增。

(5)由于未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱，因此若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，而通常用Ca2+處理大腸桿菌細胞，使其成為感受態(tài)細胞，此時細胞壁和細胞膜的通透性增大，容易吸收重組質(zhì)粒。