Question

【題目】如圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶 EcoRI、 BamHI、SamI的酶切位點(diǎn)，P為啟動(dòng)子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)，已知目的基因的兩端分別有包括coRI、 BamHI、SamI在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。外源DNA插入到或中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活（表示氨芐青霉素抗性基因，表示四環(huán)素抗性基因）。回答下列問題：

（1）基因工程中獲取目的基因常用的方法有_______________________（答出兩點(diǎn)即可）。

（2）在基因工程中使用的載體除質(zhì)粒外，還有__________、__________等。構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，為避免出現(xiàn)自身環(huán)化，通常選用____________酶對(duì)該質(zhì)粒和目的基因進(jìn)行切割，質(zhì)粒被切割后斷開了_________個(gè)磷酸二酯鍵。被切割后的質(zhì)粒和目的基因經(jīng)DNA連接酶連接后首先導(dǎo)入大腸桿菌中，為了篩選出含質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用含_____________的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

（3）將含有目的基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入植物細(xì)胞最常用的方法是__________，為檢測目的基因是否在受體細(xì)胞中表達(dá)，通常選用____________的方法進(jìn)行分子水平的檢測，此外有時(shí)還需要進(jìn)行___________的鑒定。

Answer 1

【答案】從自然界已有物種中分離、人工的方法合成（或從基因文庫中獲取目的基因、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因、直接人工合成） 噬菌體的衍生物 動(dòng)植物病毒 4（個(gè)） 氨芐青霉素 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 抗原-抗體雜交 個(gè)體生物學(xué)水平

【解析】

在基因工程中，一般需要用同一種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，而圖中的質(zhì)粒上存在三種限制酶的切割位點(diǎn)，其中兩種限制酶切割位點(diǎn)均在四環(huán)素抗性基因，解答本題應(yīng)著重圍繞這兩點(diǎn)有效信息。

（1）基因工程中獲取目的基因常用的方法有從自然界已有物種中分離、人工的方法合成（或從基因文庫中獲取目的基因、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因、直接人工合成）。

（2）基因工程中常用的載體是質(zhì)粒，除質(zhì)粒外還有噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒都可作為載體。為避免出現(xiàn)自身環(huán)化應(yīng)選擇的限制酶是EcoRI、BamHI，質(zhì)粒被切割后斷開4個(gè)磷酸二酯鍵，由于四環(huán)素基因被破壞，所以篩選出含質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

（3）基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞最常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，基因表達(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，檢測蛋白質(zhì)的方法是抗原-抗體雜交，另外還需要從個(gè)體生物學(xué)水平進(jìn)行鑒定。