Question

【題目】地溝油最大的來源為城市飯店下水道的隔油池，用脂肪酶處理地溝油具有廣泛的應(yīng)用前景。為獲得高產(chǎn)脂肪酶的菌株，并將其應(yīng)用于含地溝油的污水處理，某研究小組進(jìn)行了一些實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問題：

（1）欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細(xì)菌，應(yīng)配制以脂肪為____________的固體培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基從功能上看屬于____________培養(yǎng)基。

（2）經(jīng)過稀釋，在平板上加入0．1mL稀釋液并涂布，經(jīng)適當(dāng)時(shí)間培養(yǎng)后，在平板上計(jì)數(shù)菌落，據(jù)此可計(jì)算出每毫升培養(yǎng)液中的活菌數(shù)。這種計(jì)數(shù)方法得到的結(jié)果一般比實(shí)際值偏小，其原因可能有____________、____________。

（3）經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)得到如下表所示的結(jié)果：

稀釋倍數(shù)	101	102	103	104	105	106
培養(yǎng) 結(jié)果
計(jì)數(shù) （平均值）	難以計(jì)數(shù)	難以計(jì)數(shù)	難以計(jì)數(shù)	159	17	2

為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇表中的稀釋倍數(shù)為____________的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。某同學(xué)認(rèn)為“稀釋操作時(shí)，可以將1mL培養(yǎng)液加適量無菌水直接稀釋至所選擇的稀釋倍數(shù)，這樣可以簡(jiǎn)化步驟，省去梯度稀釋的麻煩。”該同學(xué)的說法是否合理?請(qǐng)判斷并說明理由：_____________________。

Answer 1

【答案】唯一碳源 選擇 有的菌落是由2個(gè)或2個(gè)以上細(xì)菌形成的 涂布器上還殘留少量細(xì)菌 104 不合理，在做梯度稀釋之前不能確定這個(gè)稀釋倍數(shù)的每個(gè)平板的菌落是否在30~300之間

【解析】

1、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分	根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學(xué)藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計(jì)	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

2、微生物常見的接種的方法

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

（1）欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細(xì)菌，應(yīng)配制以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基；由于只要能分解脂肪的微生物能在這種培養(yǎng)基上生存，因此從功能上看，其屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）采用稀釋涂布平板法得到的結(jié)果一般比實(shí)際值偏小，原因可能有有的菌落是由2個(gè)以上的細(xì)菌形成的、涂布器上還殘留少量細(xì)菌。

（3）根據(jù)表中培養(yǎng)結(jié)果可知，稀釋倍數(shù)為104時(shí)，培養(yǎng)基中菌落彼此分散，能通過肉眼進(jìn)行計(jì)數(shù)，且數(shù)目在30-300之間，因此為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇104稀釋倍數(shù)的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。由于在做梯度稀釋之前不能確定這個(gè)稀釋倍數(shù)的每個(gè)平板的菌落是否在30～300之間，因此這種方法不合理。