Question

【題目】將幾丁質(zhì)酶基因?qū)�入棉花�?xì)胞中,可獲得抗真菌的轉(zhuǎn)基因棉,其過程如下圖所示(注:農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上只有T-DNA片段能轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中)。

(1) 圖中基因工程的基本過程可以概括為“四步曲”，其中的核心步驟是__________________。

(2)構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒用到的工具酶是___________________。

(3) 該幾丁質(zhì)酶在溫度較高時易失去活性，科學(xué)家對編碼幾丁質(zhì)酶的基因進(jìn)行了改造，使其表達(dá)的幾丁質(zhì)酶的第3位的異亮氨酸變?yōu)榘腚装彼�，在該半胱氨酸與第97位的半胱氨酸之間形成了一個二硫鍵，提高了其耐熱性。資料中的技術(shù)屬于__________________工程范疇，其基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)的功能出發(fā)，通過__________________和人工合成的方法獲得該基因，再經(jīng)表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì)。

(4)檢驗轉(zhuǎn)基因棉的抗菌性狀，常用方法是___________________________。

(5)除了圖中所示的將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的方法，還可用_______________或____________方法。

(6)棉花細(xì)胞經(jīng)③④⑤得到試管苗，依據(jù)的理論基礎(chǔ)是______________________。

Answer 1

【答案】 構(gòu)建基因表達(dá)載體 限制酶、DNA連接酶 蛋白質(zhì) 基因修飾（改造） 接種真菌實驗（或用病原體去侵染） 花粉管通道法 基因槍法 植物細(xì)胞的全能性

【解析】由圖可知該題考查基因工程的操作步驟和植物組織培養(yǎng)，意在考察考生對知識點的識記理解掌握程度和應(yīng)用能力。

（1）基因工程的四步曲是獲取目的基因，構(gòu)建基因表達(dá)載體，導(dǎo)入受體細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定，核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體。

（2）構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒需要先用限制酶將其切割開，同時也用同種限制酶獲取目的基因，此時目的基因和質(zhì)粒有相同的黏性末端，然后用DNA連接酶將目的基因和運載體連接。

（3）因為是改的蛋白質(zhì)功能，所以屬于蛋白質(zhì)工程，基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)的功能出發(fā)，通過基因改造或修飾和人工合成的方法獲得該基因，然后再經(jīng)過表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì)。

（4）檢測轉(zhuǎn)基因棉的抗菌性狀可以從個體水平進(jìn)行檢測，常用的是進(jìn)行接種真菌實驗看否抗菌。

（5）圖中顯示的是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，除了該方法外將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞還可以用花粉管通道法和基因槍法。

（6）棉花細(xì)胞經(jīng)③脫分化、④再分化、⑤得到試管苗，依據(jù)的理論基礎(chǔ)是植物細(xì)胞的全能性。