Question

【題目】圖1表示含有目的基因D的DNA片段，圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列。現(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內切酶切割的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題：

（1）用限制酶SmaⅠ完全切割圖1的DNA片段，產物中至少有_______種不同DNA片段。

（2）為了提高實驗成功率，需要通過PCR技術擴增目的基因，以獲得大量的目的基因，在此過程中，要有一段_________________，以便根據(jù)這一序列合成引物。

（3）若將圖2中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行，形成重組質粒，那么應選用的限制酶是_______。在導入重組質粒后，為了篩選出含質粒的大腸桿菌，一般先用添加抗生素B的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，然后將生長的菌接種到只含______的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，可進一步篩選出含重組質粒的受體細胞。

（4）假設用BamHⅠ切割DNA獲取目的基因，用MboⅠ切割質粒，然后形成重組質粒，若要將插入在抗生素B抗性基因處的目的基因重新切割下來，___________（是/否/不一定）能用BamHⅠ，為什么?__________。

Answer 1

【答案】3 已知目的基因的核苷酸序列 BamHⅠ 抗生素A 不一定 因為目的基因和抗生素B抗性基因拼接處不一定出現(xiàn)GGATCC

【解析】

分析圖1：圖中DNA片段含有2個限制酶MspⅠ切割位點，可被限制酶MspⅠ切割產生三種DNA片段，基因D兩側序列為GGATCC，可被限制酶BamHⅠ切割。

分析圖2：質粒含有CCGG序列、GGATCC序列和GATC序列，其中CCGG序列可被限制酶MspⅠ切割，GGATCC序列和GATC序列可被限制酶MboⅠ切割。用限制酶BamHⅠ切割破壞了抗生素A抗性基因，但沒有破環(huán)抗生素B抗性基因，因此含有重組質粒的大腸桿菌能抗抗生素B，但不能抗抗生素A。

（1）圖1中DNA片段含有2個限制酶SmaⅠ切割位點，若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產物中至少有3種不同DNA片段。

（2）PCR的原理是DNA雙鏈復制；利用PCR技術擴增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。

（3）目的基因兩側是GGATCC序列，該序列是限制酶BamHⅠ的識別序列，因此要將質粒和目的基因D連接形成重組質粒，應選用限制酶BamHⅠ切割。

（4）用BamHⅠ切割DNA獲取目的基因，用MboⅠ切割質粒，然后形成重組質粒，用BamHⅠ不一定將插入在抗生素B抗性基因處的目的基因重新切割下來，因為目的基因和抗生素B抗性基因拼接處含有GATC，不一定出現(xiàn)GGATCC。