Question

【題目】人血清白蛋白（HSA）具有重要的醫(yī)用價值，只能從人血漿中制備。圖一是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA的兩條途徑，其中報告基因表達(dá)的產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。圖二為相關(guān)限制酶的識別序列和切割位點(diǎn)，以及HAS基因兩側(cè)的核苷酸序列。據(jù)圖回答下列問題：

（1）依據(jù)圖一和圖二分析，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時下列敘述錯誤的是___________。

A．應(yīng)該使用酶B和酶C獲取HSA基因

B．應(yīng)該使用酶A和酶B切割Ti質(zhì)粒

C．成功建構(gòu)的重組質(zhì)粒含1個酶A的識別位點(diǎn)

D．成功建構(gòu)的重組質(zhì)粒用酶C處理將得到2個DNA片段

（2）PCR技術(shù)應(yīng)用的原理是____________，在利用該技術(shù)獲取目的基因的過程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用____________尋找HSA基因的位置并進(jìn)行擴(kuò)增。

（3）圖一過程①中需將植物細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合后共同培養(yǎng)，旨在讓___________整合到植物細(xì)胞染色體DNA上；除盡農(nóng)桿菌后，還須轉(zhuǎn)接到含____________的培養(yǎng)基上篩選出轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞。

（4）圖一③過程中將目的基因?qū)�入綿羊受體細(xì)胞，采用最多，也是最為有效的方法_________。

（5）為檢測HSA基因的表達(dá)情況，可提取受體細(xì)胞的_________________，用抗血清白蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

Answer 1

【答案】C DNA（雙鏈）復(fù)制 引物 T-DNA 無色物質(zhì)K 顯微注射技術(shù) 蛋白質(zhì)

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）A、由圖中DNA序列和酶切位點(diǎn)序列可知應(yīng)使用酶B和酶C切割獲取HSA基因，A正確；

B、導(dǎo)入的目的基因時應(yīng)在T-DNA上，因此Ti質(zhì)粒應(yīng)用酶A和酶B切割，因?yàn)槊?/span>A和酶B切出的黏性未不能互補(bǔ)配對，可以將目的基因連接進(jìn)去，B正確；

C、據(jù)圖一圖二分析可知，成功建構(gòu)的重組質(zhì)粒上不再有酶A的識別位點(diǎn)，C錯誤；

D、成功構(gòu)建的重組質(zhì)粒用酶C處理能得到2個DNA片段，應(yīng)是A-C，和C-A片段，D正確。

故選C。

（2）PCR技術(shù)應(yīng)用的原理是DNA（雙鏈）復(fù)制，在利用該技術(shù)獲取目的基因的過程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用引物尋找HSA基因的位置并進(jìn)行擴(kuò)增。

（3）圖一過程①中需將植物細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合后共同培養(yǎng)，利用農(nóng)桿菌的侵染特性，讓T-DNA整合到植物細(xì)胞染色體DNA上；除盡農(nóng)桿菌后，為了篩選出轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞，利用重組質(zhì)粒上的報告基因表達(dá)的產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色的特性，進(jìn)行篩選，故還須將植物細(xì)胞轉(zhuǎn)接到含無色物質(zhì)K的培養(yǎng)基上。

（4）圖一③過程中將目的基因?qū)�入綿羊受體細(xì)胞，通常采用較多的方法是顯微注射技術(shù)。

（5）為檢測HSA基因的表達(dá)情況，可利用抗原抗體雜交技術(shù)，具體做法是：提取受體細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用抗血清白蛋白的抗體做雜交實(shí)驗(yàn)。