Question

【題目】飼養(yǎng)動物常用的植物飼料中含有難溶的植酸鈣等物質，很難被動物吸收利用，還影響對其他營養(yǎng)物質的利用。若在飼料中添加植酸酶，則能催化其水解成為可以吸收利用的磷酸鹽等。以下是科研人員從作物根部土壤中分離產(chǎn)植酸梅的菌株的過程示意圖。請分析作答。

（1）圖示培養(yǎng)基中除了添加 以外，應含有碳源、氮源、水、其他無機鹽等基本營養(yǎng)物質。

（2）接種以前要進行系列稀釋操作，目的是在固體培養(yǎng)基表面形成 。根據(jù)土壤樣品的稀釋倍數(shù)和接種稀釋液的體積，統(tǒng)計平板上的 就能大致推測出樣品中的活菌數(shù)。通常每種稀釋液需涂布三個平板，取其平均值。若將最后一個試管中的菌液每次吸取 0．lmL涂布培養(yǎng)后獲得平均值是48個菌落，則lg土壤中含有此菌的菌株數(shù)是 。

（3）在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下到選項不需要的是 （填序號）。

①酒精 ②培養(yǎng)皿 ③顯微鏡 ④無菌水

（4）在涂布平板時，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是 。

（5）產(chǎn)植酸梅的菌株會水解植酸鈣，菌落的周圍將形成透明的區(qū)域，根據(jù)透明區(qū)域，根據(jù)透明區(qū)域的有無，可初步判斷該菌是否產(chǎn)植酸酶。圖中降解圈大小與植酸酶的 有關。實驗結果顯示A-E五種菌株中， 是產(chǎn)值酸酶最理想的菌株。分離并獲得菌種后，若需長期保存，應使用 法。

Answer 1

【答案】（10分）（1）植酸鈣 （2）單個菌落 菌落數(shù) 4．8×107 （2分）

（3）③ （4）培養(yǎng)基表面的菌懸液會出現(xiàn)積液，導致菌體堆積，影響分離效果（不易培養(yǎng)得到單個菌落）

（5）量與活性（全對給分） E 甘油管藏

【解析】

試題分析：（1）從作物根部土壤中分離產(chǎn)植酸酶的菌株需要使用含植酸鈣的選擇培養(yǎng)基,因此圖示培養(yǎng)基中除了添加植酸鈣以外，應含有碳源、氮源、水、其他無機鹽等基本營養(yǎng)物質。

（2）接種以前要進行系列稀釋操作，即采用稀釋平板法在固體培養(yǎng)基表面形成單個菌落，以達到純化菌種的。根據(jù)土壤樣品的稀釋倍數(shù)和接種稀釋液的體積，統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)就能大致推測出樣品中的活菌數(shù)。若將最后一個試管中的菌液每次吸取 0．lmL涂布培養(yǎng)后獲得平均值是48個菌落，則lg土壤中含有此菌的菌株數(shù)是48×10×103×102＝4．8×107個。

（3）在系列稀釋操作中，需要用無菌水對樣品稀釋；涂布平板操作的程序為：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中→取少量菌液滴加到培養(yǎng)基表面→涂布前需將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s→用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。綜上所述，在樣品稀釋和涂布平板步驟中，不需要顯微鏡，即③。

（4）在涂布平板時，若滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量過多，則會使培養(yǎng)基表面的菌懸液出現(xiàn)積液，導致菌體堆積，影響分離效果，不易培養(yǎng)得到單個菌落，因此滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多。

（5）植酸鈣的不溶解性使培養(yǎng)基中形成白色渾濁，產(chǎn)植酸酶的菌株會水解植酸鈣，使菌落的周圍形成透明降解圈，降解圈大小與植酸酶的量與活性有關。實驗結果顯示：在A-E五種菌株中，E菌落周圍形成的透明降解圈最大，因此E菌株是產(chǎn)植酸酶最理想的菌株。若需長期保存分離并獲得菌種，應使用甘油管藏法。