Question

【題目】回答下列有關(guān)微生物與基因工程有關(guān)的問題
（1）基因工程的第一步是獲取目的基因，獲取的方法包括和化學(xué)方法人工合成．如果要想獲取人的胰島素基因，只能用化學(xué)方法人工合成，具體的做法是從人體細(xì)胞中獲取胰島素mRNA，再通過過程即可獲得目的基因．
（2）基因工程的第二步是將目的基因和運載體重組，重組時需要選擇合適的限制酶和酶．常用的運載體是細(xì)菌質(zhì)粒（如圖1所示），質(zhì)粒中ori為質(zhì)粒復(fù)制所必需的DNA序列，啟動子是使轉(zhuǎn)錄開始的一段DNA序列，終止子是提供轉(zhuǎn)錄終止信號的DNA序列．青霉素抗性基因作為基因，以便于篩選．質(zhì)粒上還有多種限制酶的切點，若目的基因上也有上述質(zhì)粒中相應(yīng)限制酶的切點，為避免目的基因自身的環(huán)化并能與圖中質(zhì)粒準(zhǔn)確重組，可選用的限制酶是 A．NdeI和XbaI 　 B．NdeI和BamHI C．XbaI 　 D．PstI E．BamHI

（3）基因工程的第三步是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，例如，轉(zhuǎn)基因動物常用的受體細(xì)胞為 ．
（4）基因工程的第四步是篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞． ①如用大腸桿菌作為受體細(xì)胞，則該大腸桿菌中不應(yīng)含有青霉素抗性基因，請闡述其原因？ ．
②培養(yǎng)導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌時，需配帛培養(yǎng)基．該培養(yǎng)基除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)加入的物質(zhì)有（多選）
A．細(xì)胞分裂素　 B．瓊脂　 C．噬菌體　 D．青霉素
③培養(yǎng)基配制和滅菌時，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是；
一般對配置的培養(yǎng)液采用法滅菌．
④微生物接種培養(yǎng)時，可采用兩種方法．如圖2為接種后微生物培養(yǎng)的效果圖．那么獲得圖A效果的接種方法是 ， 獲得圖B效果的接種方法是 ．
（5）與大腸桿菌相比，嗜熱菌具有的特點是 ． （多選）
A.對青霉素不敏感
B.對真核生物的親緣關(guān)系更遠(yuǎn)
C.細(xì)胞的DNA中，堿基G和C含量較高，較穩(wěn)定
D.沒有菌毛和質(zhì)粒．

Answer 1

【答案】
（1）從某種生物體細(xì)胞中分離；胰島B；逆轉(zhuǎn)錄
（2）DNA連接；標(biāo)記；B
（3）受精卵
（4）若含有則會干擾篩選；B．D；先調(diào)節(jié)pH后滅菌；高壓滅菌；涂布法；劃線法
（5）AC
【解析】解：（1）如果要獲取目的基因，可以采取的方法通常包括從細(xì)胞中分離和通過化學(xué)方法人工合成．如果要想獲取人的胰島素基因，只能用化學(xué)方法人工合成，具體的做法是從人體胰島B細(xì)胞中獲取胰島素mRNA，再通過逆轉(zhuǎn)錄過程即可獲得目的基因．（2）將目的基因和運載體重組時需要用同一種的限制酶切割目的基因和運載體，再用DNA連接酶連接．青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因．根據(jù)啟動子和終止子的生理作用可知，目的基因應(yīng)導(dǎo)入啟動子和終止子之間．圖中看出，兩者之間存在于三種限制酶切點，但是由于Xbal在質(zhì)粒不止一個酶切位點，因此為使PCR擴增的目的基因重組進該質(zhì)粒，擴增的目的基因兩端需分別引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的識別序列．（3）轉(zhuǎn)基因動物常用的受體細(xì)胞最好用受精卵．（4）①如用大腸桿菌作為受體細(xì)胞，若大腸桿菌含有青霉素抗性基因則會干擾篩選，因此該大腸桿菌中不應(yīng)含有青霉素抗性基因．②培養(yǎng)導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌時，需配制培養(yǎng)基．該培養(yǎng)基除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)加入的物質(zhì)有瓊脂和青霉素．③培養(yǎng)基配制和滅菌時，先調(diào)節(jié)pH后滅菌．一般對配置的培養(yǎng)液采用高壓蒸汽滅菌法滅菌．④獲得圖A效果是均勻分布的，接種方法是涂布法；獲得圖B效果是線性分布，接種方法是劃線法．（5）A、大腸桿菌和嗜熱菌均屬于細(xì)菌，對青霉素和四環(huán)素均敏感，A正確； B、大腸桿菌和嗜熱菌與真核生物的親緣關(guān)系都很遠(yuǎn)，B錯誤；
C、由于嗜熱菌適宜生存在高溫條件下，因此DNA結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，而C和G之間以3個氫鍵連接，A和T之間以2個氫鍵連接，因此嗜熱菌細(xì)胞的DNA中堿基G和C含量較高，較穩(wěn)定，C正確；
D．大腸桿菌和嗜熱菌都有菌毛和質(zhì)粒，D錯誤．
故選：AC．
所以答案是：（1）從某種生物體細(xì)胞中分離 胰島B 逆轉(zhuǎn)錄（2）DNA連接 標(biāo)記 B（3）受精卵（4）①若含有則會干擾篩選 ②BD③先調(diào)節(jié)pH后滅菌 高壓滅菌④涂布法 劃線法（5）A C
【考點精析】掌握基因工程的原理及技術(shù)是解答本題的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．