Question

【題目】下面是將某細(xì)菌的基因A導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi)，制備“工程菌”的示意圖：

請據(jù)圖回答：

（1）獲得A有兩條途徑：一是以A的mRNA為模板，在 酶的催化下，合成互補(bǔ)的單鏈DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需基因；二是根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的mRNA序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對原則，推測其DNA的 序列，再通過化學(xué)方法合成所需基因。

（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA時(shí)，需要在反應(yīng)體系中添加的有機(jī)物質(zhì)有 、 、4種脫氧核苷酸三磷酸和 酶，擴(kuò)增過程可以在PCR擴(kuò)增儀中完成。

（3）在基因工程中，利用大腸桿菌生產(chǎn)胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子，其中啟動(dòng)子的作用是 。在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用 處理大腸桿菌，其目的是使其成為 細(xì)胞，有利于吸收重組DNA分子。為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可利用 技術(shù)；為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA是否翻譯成蛋白質(zhì)，常用 技術(shù)。

Answer 1

【答案】（1）逆轉(zhuǎn)錄（或“反轉(zhuǎn)錄”） 脫氧核苷酸

（2）引物 模板（A基因）（兩空可調(diào)換位置） 熱穩(wěn)定DNA聚合（或“Taq”）

（3）RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位 Ca2＋ 感受態(tài) 分子雜交 抗原—抗體雜交

【解析】

試題分析：（1）獲得A有兩條途徑：一是以A的mRNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，合成合成雙鏈DNA，從而獲得所需基因；二是根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的mRNA序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對原則，推測其DNA的脫氧核苷酸序列，再通過人工合成（化學(xué)）方法合成所需基因。

（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA時(shí)所需的條件：引物、模板DNA（目的基因或A基因）、原料（4種脫氧核糖核苷酸）和耐熱性的DNA聚合酶等。

（3）啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)．在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用Ca2+處理大腸桿菌，使大腸桿菌變成感受態(tài)細(xì)胞，以利于表達(dá)載體進(jìn)入；為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為DNA分子雜交技術(shù)．為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成人胰島素，常用抗原-抗體雜交技術(shù)。