Question

【題目】如圖表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖右表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列．現(xiàn)有MspI、BamHI、MboI、SmaI　4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．
（1）圖左DNA分子中的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個脫氧核苷酸之間由（化學(xué)鍵）連接．
（2）若用限制酶SmaI完全切割圖中含有目的基因D的DNA片段，其產(chǎn)物長度分為 ．
（3）為了提高試驗成功率，需要通過技術(shù)擴增目的基因，以獲得目的基因的大量拷貝．在目的基因進(jìn)行擴增時，加入的引物有A、B兩種，引物的作用是 ， 若該目的基因擴增n代，則其中含有A、B引物的DNA分子有個．
（4）若將圖右中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是 ． 經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最有可能的原因是 ．
（5）導(dǎo)入目的基因的植物細(xì)胞，經(jīng)過植物組織培養(yǎng)技術(shù)得到幼苗，該技術(shù)利用的原理是 ．

Answer 1

【答案】
（1）磷酸二酯鍵
（2）537、790、661
（3）PCR；使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始復(fù)制；2n﹣2
（4）BamH1；同種限制酶切割形成的末端相同,部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接
（5）植物細(xì)胞具有全能性
【解析】解：（1）DNA分子中的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個脫氧核苷酸之間由磷酸二酯鍵連接．（2）根據(jù)圖1中的酶切位點，可判斷用限制酶SmaⅠ完全切割該DNA片段，其產(chǎn)物長度為537bp、790bp、661bp．（3）為了提高試驗成功率，需要通過PCR技術(shù)擴增目的基因，以獲得目的基因的大量拷貝．引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始復(fù)制．PCR技術(shù)運用了DNA復(fù)制的原理，因此目的基因擴增n代后產(chǎn)生子代DNA分子2n．又由于親代DNA分子的兩條鏈中不含引物，因此含有A、B引物的DNA分子有2n﹣2 個．（4）限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位點位于目的基因D上，若用這兩種酶切割會被破壞目的基因D；運載體的兩個標(biāo)記基因上都有限制酶MboⅠ的切割位點，用該酶切割會破壞這兩個標(biāo)記基因，因此只能選用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和運載體．由于同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接，這樣會導(dǎo)致部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)．（5）植物組織培養(yǎng)技術(shù)的原理是植物細(xì)胞具有全能性．

所以答案是：（1）磷酸二酯鍵；（2）537、790、661 ；（3）PCR；使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始復(fù)制；2n﹣2；（4）BamH1；同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接；（5）植物細(xì)胞具有全能性

【考點精析】關(guān)于本題考查的基因工程的原理及技術(shù)，需要了解基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)才能得出正確答案．