Question

【題目】I、抗體的制備經(jīng)歷了細胞學層面和分子學層面兩種合成途徑的研究。下列是生物學技術(shù)制備抗體的兩個途徑模式簡圖。

（1）在獲取抗體之前，需要向健康人體注射特定抗原（如乙肝疫苗），并且每隔一周重復注射一次。免疫學稱細胞A為_______________________，該細胞在人體主要介導____________________免疫。

（2）過程①至②抗體的獲取稱為____________________，其中①是__________________過程，Y細胞稱為________________。

II、上圖中，結(jié)構(gòu)甲的建構(gòu)可用下圖1和2表示。圖1表示含有目的基因的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列�，F(xiàn)有4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為下表所示。

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmaⅠ
識別序列及切割位點

（1）若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，其產(chǎn)物長度為________________。

（2）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T-A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛��?/span>d。從雜合子中分離出圖1及對應的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有_______種不同長度的DNA片段。

（3）上述結(jié)構(gòu)中的建構(gòu)過程可知，在限制酶作用下得到的產(chǎn)物有多種，生產(chǎn)上多采用_______技術(shù)來降低目的基因分離提取的難度，也有利于限制酶的回收和再利用。

（4）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行拼接，形成重組質(zhì)粒，那么應選用的限制酶是_____。在導入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要添加______的______（固體/液體）培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。在培養(yǎng)前，培養(yǎng)基必須先經(jīng)過滅菌，所用的方法是______________；采用__________的方法接種以獲得單菌落后繼續(xù)篩選。

Answer 1

【答案】漿細胞（效應B淋巴細胞） 體液 單克隆抗體 細胞融合 雜交瘤細胞 537、790、661 4 酶的固定化 BamHⅠ 抗生素B 固體 高壓滅菌 劃線（或涂布）

【解析】

據(jù)圖分析，細胞A表示效應B細胞，細胞Y表示雜交瘤細胞，①過程表示動物細胞融合，②過程動物細胞培養(yǎng)，③過程提取信使RNA，④過程表示逆轉(zhuǎn)錄，⑤表示基因表達載體的構(gòu)建，⑥表示導入受體細胞。

I、（1）向健康人體注射特定抗原，提取出A漿細胞（效應B淋巴細胞），在人體參與體液免疫。

（2）過程①至②抗體的獲取稱為單克隆抗體，其中①是細胞融合過程，Y細胞稱為雜交瘤細胞。

II、（1）SmaⅠ識別的序列為GGGCCC，切割會產(chǎn)生平末端；圖1中DNA片段含有兩個SmaⅠ識別位點，第一個識別位點在左端534 bp序列向右三個堿基對的位置；第二個識別位點在右端658bp序列向左三個堿基的位置，從而兩個位點切割后產(chǎn)生的DNA片段的長度分布為534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段長度為537、790、661。

（2）在雜合子體內(nèi)含有基因D和基因d，基因D的序列中含有兩個識別位點，經(jīng)過SmaI完全切割會產(chǎn)生537bp、790bp和661bp三種不同長度的片段，基因d的序列中含有一個識別位點，經(jīng)過切割后會產(chǎn)生1327bp和661bp兩種長度的片段，綜上，雜合子中分離到該基因的DNA片段經(jīng)過切割后會產(chǎn)生4種不同長度的片段。

（3）固定化酶的優(yōu)點：①既能與反應物接觸，又能與產(chǎn)物分離；②可以反復利用。

（4）能夠獲取目的基因并切開質(zhì)粒的限制酶有識別序列為GGATCC的BamH I和識別序列為GATC的MboI，若使用Mbo I會同時破壞質(zhì)粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I來切割目的基因和質(zhì)粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌。因為目的基因和運載體是用同種限制酶切割的，目的基因兩端的末端和質(zhì)粒切割后的兩個末端都能進行互補，可能出現(xiàn)目的基因反向連接在運載體上的情況，導致基因D不能正確表達。故在導入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要添加抗生素B的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。在培養(yǎng)前，培養(yǎng)基常用高壓滅菌方法滅菌；采用劃線（或涂布）的方法接種以獲得單菌落后繼續(xù)篩選。