Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞。科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，其技術(shù)流程如圖（圖中數(shù)字序號(hào)表示的是相關(guān)過(guò)程）。請(qǐng)回答：

（1）過(guò)程①將進(jìn)行培養(yǎng)的上皮細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞中，接受細(xì)胞核的卵母細(xì)胞應(yīng)處于___________時(shí)期；過(guò)程②利用的技術(shù)是____________，當(dāng)重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時(shí)，可從其____________分離出ES細(xì)胞，ES細(xì)胞在功能上具有_______________________的特點(diǎn)。

（2）過(guò)程③中獲取的目的基因是____________，若要將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，需要構(gòu)建____________，構(gòu)建之前可以根據(jù)____________設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。為了檢測(cè)ES細(xì)胞的DNA上是否插入了干擾素基因，可采用____________技術(shù)。

（3）按此方法和圖示技術(shù)流程，完成Rag2基因缺失小鼠的基因治療涉及的多種酶，其中有（3種）____________和耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）等。測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用____________進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

Answer 1

【答案】MⅡ中 早期胚胎培養(yǎng) 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 發(fā)育的全能性 Rag2基因 含Rag2基因的基因表達(dá)載體 Rag2基因的脫氧核苷酸序列（或堿基對(duì)序列或遺傳信息） DNA分子雜交 限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和胰蛋白酶 抗Rag2蛋白的抗體

【解析】

過(guò)程①為核移植，用處于MⅡ中期去核的卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞，因?yàn)槠潴w積大、易操作，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，細(xì)胞質(zhì)中含有促進(jìn)細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)。過(guò)程②為早期胚胎培養(yǎng)，ES細(xì)胞取自囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)或早期胚胎的原始性腺�；�因工程基本操作順序：目的基因獲取，表達(dá)載體的構(gòu)建，將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，目的基因的檢測(cè)與鑒定。目的基因的檢測(cè)與鑒定方法：導(dǎo)入檢測(cè)用DNA分子雜交技術(shù)，轉(zhuǎn)錄檢測(cè)用分子雜交技術(shù)，翻譯檢測(cè)用抗原——抗體雜交法。

（1）用處于MⅡ中期去核的卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞，因?yàn)樗�的�?xì)胞質(zhì)中含有促進(jìn)細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)，有利于重組細(xì)胞的發(fā)育。過(guò)程②為早期胚胎培養(yǎng)，當(dāng)重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞，ES細(xì)胞在功能上具有全能性。

（2）過(guò)程③中獲取的目的基因是Rag2基因，要將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，需要構(gòu)建含Rag2基因的基因表達(dá)載體，構(gòu)建之前可以根據(jù)Rag2基因的脫氧核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。為了檢測(cè)ES細(xì)胞的DNA上是否插入了干擾素基因，可采用DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)。

（3）基因重組技術(shù)需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶，細(xì)胞培養(yǎng)需要胰蛋白酶。測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。