Question

【題目】研究人員利用小鼠（2N=40）的單倍體ES細(xì)胞（只有一個(gè)染色體組），成功培育出轉(zhuǎn)基因小鼠，其主要技術(shù)流程如圖所示：
注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四種限制酶，箭頭指向的位置為限制酶的切割位置；Amp′是氨芐青霉素抗性基因，Neo′是G418抗性基因．
（1）重組質(zhì)粒上的抗生素抗性基因可作為 ， 其作用是有利于篩選出含有目的基因的細(xì)胞，氨芐青霉素不能有效殺死小鼠細(xì)胞，而一定濃度的G418能有效殺死不具有Neo′的小鼠細(xì)胞，結(jié)合如圖推測(cè)，過(guò)程①選用的2種限制酶是 （選填圖中的編號(hào)），圖中③處的培養(yǎng)液應(yīng)添加（填“氨芐青霉素”或“G418”）．
（2）若圖中過(guò)程①選用的2種限制酶識(shí)別序列和切割位置分別是 和 ，則經(jīng)這兩種限制酶切割后所產(chǎn)生的黏性末端是 ， 此時(shí)，圖中過(guò)程②應(yīng)選用（填“EcoliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）．
（3）據(jù)圖分析，細(xì)胞乙內(nèi)除線粒體DNA外，還有個(gè)DNA分子；細(xì)胞乙發(fā)育成桑椹胚的過(guò)程中細(xì)胞分裂方式是 ， 將細(xì)胞乙培養(yǎng)成桑椹胚的技術(shù)稱(chēng)為技術(shù)．

Answer 1

【答案】
（1）標(biāo)記基因；Ⅰ和Ⅱ；G418
（2）；T4DNA連接酶
（3）40；有絲分裂；早期胚胎培養(yǎng)
【解析】解：（1）重組質(zhì)粒上的抗生素抗性基因可作為標(biāo)記基因，其作用是有利于篩選出含有目的基因的細(xì)胞．根據(jù)題意可知，氨芐青霉素不能有效殺死小鼠細(xì)胞，而一定濃度的G418能有效殺死不具有Neo′的小鼠細(xì)胞，因此應(yīng)選擇Neo′作為標(biāo)記基因，即質(zhì)粒上Neo′不能用限制酶切割，則過(guò)程①應(yīng)選用Ⅰ和Ⅱ2種限制酶，圖中③處的培養(yǎng)液應(yīng)添加G418．（2）若圖中過(guò)程①選用的2種限制酶識(shí)別序列和切割位置分別是 和 ，前者被限制酶切割形成的是黏性末端，后者被限制酶切割形成的是平末端，即經(jīng)這兩種限制酶切割后所產(chǎn)生的黏性末端是 ，此時(shí)，圖中過(guò)程②應(yīng)選用T4DNA連接酶．（3）根據(jù)題意可知，小鼠的染色體為2N=40，因此單倍體ES細(xì)胞的細(xì)胞核中染色體有20條，完成減數(shù)分裂后的卵細(xì)胞中也有20條染色體，即細(xì)胞乙內(nèi)除線粒體DNA外，細(xì)胞核中有40個(gè)DNA分子；細(xì)胞乙發(fā)育成桑椹胚的過(guò)程中細(xì)胞分裂方式是有絲分裂，將細(xì)胞乙培養(yǎng)成桑椹胚的技術(shù)稱(chēng)為早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)． 所以答案是：（1）標(biāo)記基因Ⅰ和ⅡG418（2）

T4DNA連接酶（3）40 有絲分裂 早期胚胎培養(yǎng)
【考點(diǎn)精析】掌握基因工程的原理及技術(shù)是解答本題的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．