Question

【題目】α-1抗胰蛋白酶（α-1—AT）是人類血漿中最重要的蛋白酶抑制劑，其主要作用是保護(hù)機(jī)體正常細(xì)胞和器官不受蛋白酶的損傷，抑制感染和炎癥，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的平衡。下圖是以基因工程技術(shù)獲取重組α-1抗胰蛋白酶（HumanA1AT）的兩種方法�；卮鹣铝袉栴}：

（1）為獲取α-1—AT基因，可采集人的血液，提取_____________合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增α-1—AT基因，該技術(shù)需要的酶是_______________。

（2）b過程中，可添加酚類化合物，其作用是______________。將α-1—AT基因?qū)�入大腸桿菌細(xì)胞時(shí)，可用____________處理細(xì)胞，使其變?yōu)楦惺軕B(tài)細(xì)胞。

（3）已知α-1抗胰蛋白酶需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確的空間結(jié)構(gòu)才能有活性。據(jù)此推導(dǎo)，方法_______（填“Ⅰ”或“Ⅱ”）具有優(yōu)勢，其優(yōu)勢是______________________。

（4）若要檢測小麥胚乳細(xì)胞或大腸桿菌細(xì)胞中是否翻譯出HumanA1AT，可用的檢測物質(zhì)是HumanA1AT的______（填“基因”或“抗體”）。

Answer 1

【答案】 總RNA（或mRNA） 熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶） 吸引農(nóng)桿菌移向小麥?zhǔn)荏w細(xì)胞，有利于α-1—AT基因轉(zhuǎn)化成功 Ca2+ Ⅰ 小麥屬于真核生物，具有膜系統(tǒng)，能對(duì)初始Human A1AT多肽進(jìn)行高效加工 抗體

【解析】【試題分析】

本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。

（1）總cDNA是以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成的，所以需要提取人的總RNA或mRNA；PCR擴(kuò)增的原理是DNA復(fù)制， 需要的酶是熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

（2）b過程表示農(nóng)桿菌感染小麥?zhǔn)荏w細(xì)胞，酚類物質(zhì)可吸引農(nóng)桿菌移向小麥?zhǔn)荏w細(xì)胞，使農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T－DNA轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上，有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化；將α-1—AT基因?qū)�入大腸桿菌細(xì)胞時(shí)，可用Ca2+處理細(xì)胞，使其變?yōu)楦惺軕B(tài)細(xì)胞。

（3）由于大腸桿菌為原核生物，無生物膜系統(tǒng)，而小麥為真核生物，具有生物膜系統(tǒng)，故要獲取α-1抗胰蛋白酶，選擇方法Ⅰ具有優(yōu)勢，其優(yōu)勢是小麥屬于真核生物，具有膜系統(tǒng)，能對(duì)初始Human A1AT多肽進(jìn)行高效加工。

（4）若要檢測小麥胚乳細(xì)胞或大腸桿菌細(xì)胞中是否翻譯出HumanA1AT，可用抗原—抗體雜交技術(shù)，所以可用的檢測物質(zhì)是HumanA1AT的抗體。