Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞．科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療．其技術(shù)流程如圖：
請回答：
（1）步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的 ．
（2）ES細(xì)胞除來源于早期胚胎外，還可來源于 ， 它在形態(tài)上的特性；在功能上的特性是 ．
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag2基因的表達(dá)載體．可以根據(jù)Rag2基因的設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段．為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有的酶切位點(diǎn)．
（4）為檢測Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞中的 ， 用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)．

Answer 1

【答案】
（1）細(xì)胞核
（2）原始性腺；體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯；具有發(fā)育的全能性,即可以分化為成年動物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞
（3）核苷酸序列； HindⅢ和PstⅠ限制酶
（4）蛋白質(zhì)
【解析】解：（1）核移植是將體細(xì)胞核移植到去核的卵母細(xì)胞中，所以實(shí)驗(yàn)前要去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核．（2）ES細(xì)胞來源于早期胚胎和原始性腺，它在形態(tài)上的特性是：體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯；在功能上的特性是具有發(fā)育的全能性，即可以分化為成年動物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞．（3）步驟③中，根據(jù)Rag2基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物并擴(kuò)增Rag2基因片段．基因工程中構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，若用HindIII和PstI限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段，則為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點(diǎn)．（4）為檢測Rag2基因的表達(dá)情況，可采用抗原﹣抗體雜交法，即提取治療后的小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)（抗原），用抗Rag2 蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)．

所以答案是：（1）細(xì)胞核（2）原始性腺 體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯 具有發(fā)育的全能性，即可以分化為成年動物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞（3）核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ限制酶（4）蛋白質(zhì)

【考點(diǎn)精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術(shù)和動物細(xì)胞核移植技術(shù)的相關(guān)知識點(diǎn)，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)；動物體細(xì)胞核移植是將動物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新胚胎最終發(fā)育為動物個(gè)體才能正確解答此題．