Question

【題目】普通煙草轉(zhuǎn)入抗鹽基因培育抗鹽煙草的過程如圖所示．已知含抗鹽基因的DNA和質(zhì)粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位點(diǎn)，質(zhì)粒上另有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因．

（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用限制酶______對______進(jìn)行切割，以保證它們定向連接．限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個(gè)脫氧核苷酸之間的鍵，具體說就是______和______之間的鍵。

（2）如果目的基因直接注入煙草細(xì)胞，一般會被煙草細(xì)胞______．質(zhì)粒的作用是______。

（3）切割后的目的基因與質(zhì)粒由______酶連接成重組質(zhì)粒．篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)菌，應(yīng)在其培養(yǎng)基中加入______，理由是______。

（4）從個(gè)體水平鑒定抗鹽轉(zhuǎn)基因煙草是否培育成功的方法是______。

Answer 1

【答案】salⅠ、HindⅢ酶 含抗鹽基因的DNA和質(zhì)粒進(jìn)行切割 脫氧核糖 磷酸 核酸酶分解 運(yùn)載體 DNA連接 分別加入氨芐青霉素、四環(huán)素 添加青霉素的培養(yǎng)基中成活，四環(huán)素中不成活的為重組質(zhì)粒．因?yàn)橹亟M質(zhì)粒帶有抗氨芐青霉素基因，而四環(huán)素基因被破壞 用一定濃度鹽水澆灌或移栽到鹽堿地中

【解析】

圖示為轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過程，首先構(gòu)建基因表達(dá)載體；其次采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（煙草細(xì)胞）；再采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將含有目的基因的煙草細(xì)胞培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草。

（1）分析題圖可知，構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用salⅠ酶和HindⅢ酶對含抗鹽基因的外源DNA和質(zhì)粒進(jìn)行切割，這樣會形成不同的黏性末端，可以防止目的基因、質(zhì)粒的自身連接，以保證目的基因和質(zhì)粒的定向連接。限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個(gè)脫氧核苷酸之間的鍵，具體說就是脫氧核糖和磷酸之間的磷酸二酯鍵。

（2）如果目的基因直接注入煙草細(xì)胞，一般會被煙草細(xì)胞核酸酶分解，質(zhì)粒一般作為基因工程的運(yùn)載體。

（3）切割后的目的基因與質(zhì)粒由DNA連接酶連接成重組質(zhì)粒。篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)菌，應(yīng)在其培養(yǎng)基中分別加入氨芐青霉素、四環(huán)素，添加青霉素的培養(yǎng)基中成活，四環(huán)素中不成活的為重組質(zhì)粒。因?yàn)橹亟M質(zhì)粒帶有抗氨芐青霉素基因，而四環(huán)素基因被破壞。

（4）從個(gè)體水平鑒定抗鹽轉(zhuǎn)基因煙草是否培育成功的方法是用一定濃度鹽水澆灌或移栽到鹽堿地中。