Question

【題目】研究發(fā)現(xiàn)HOXA7基因表達的蛋白質(zhì)具有DNA結(jié)合及轉(zhuǎn)錄因子活性， 調(diào)控胚胎及成體細胞增殖、分化�？蒲腥藛T對研究HOXA7基因在宮頸癌中的功能作用做了相關(guān)實驗。請回答問題：

（1）癌細胞具有無限___________的特點，宮頸癌發(fā)生的根本原因是___________。

（2）利用_____酶分別對HOXA7基因干擾序列—si-HOXA7（可以與HOXA7的mRNA發(fā)生堿基互補配對）和載體（plent-U6-GFP）進行切割，并用___________酶連接，構(gòu)建表達載體plent-U6-GFP/si-HOXA7， 并以空載體plent-U6- GFP（NC)為對照。將重組質(zhì)粒plent-U6-GFP/si-HOXA7和對照質(zhì)粒plent-U6-GFP用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染宮頸癌Siha細胞，獲得實驗組細胞（Siha/si-HOXA7）和對照組細胞（Siha/NC）。分別采用RT-PCR法和抗原—抗體雜交檢測獲得細胞中的HOXA7 mRNA（圖1A）和HOXA7蛋白質(zhì)（圖1B）水平，結(jié)果如圖1。

注：GAPDH和β-actin在各組織和細胞中的表達相對恒定，作為參照物。

與對照組相比，實驗組HOXA7基因表達的mRNA和蛋白質(zhì)______________，說明_________（成功/未成功）建立可以用于后續(xù)實驗的Siha/si-HOXA7細胞系。

（3）為進一步研究HOXA7對宮頸癌細胞體外增殖能力的影響， 取實驗組細胞Siha/si-HOXA7和對照組細胞Siha/NC培養(yǎng)， 檢測細胞的平板克隆形成能力，結(jié)果如圖2（A）；利用流式細胞術(shù)檢測實驗組和對照組的細胞周期，結(jié)果如圖2（B）。

由圖2（A）結(jié)果可知，與對照組相比，實驗組細胞Siha/si-HOXA7_________，由此可以推測HOXA7基因能夠________（促進或抑制）宮頸癌細胞體外增殖；結(jié)合流式細胞術(shù)檢測結(jié)果，推測HOXA7對人宮頸癌細胞的作用機制是______________。

Answer 1

【答案】分裂（增殖） 原癌基因或抑癌基因突變 限制性內(nèi)切（限制） DNA連接 均明顯低于對照組 成功 克隆形成能力明顯減弱（增殖能力減弱/細胞周期阻滯 ）繼而導(dǎo)致細胞增殖能力降低 促進宮頸癌細胞體外增殖 G1期細胞增多， S期細胞減少

【解析】

據(jù)圖分析，圖1中A、B兩圖顯示，與對照組相比，實驗組細胞（Siha/si-HOXA7）的HOXA7表達產(chǎn)生的mRNA和蛋白質(zhì)都比對照組少；圖2A圖顯示，培養(yǎng)皿中實驗組細胞（Siha/si-HOXA7）數(shù)量明顯少于對照組，說明HOXA7基因能夠促進宮頸癌細胞體外增殖。

（1）細胞癌變的根本原因是原癌基因或抑癌基因突變，癌細胞具有無限增殖等特點。

（2）切割基因和質(zhì)粒應(yīng)該用限制酶，連接切割后的質(zhì)粒和目的基因應(yīng)該用DNA連接酶；據(jù)圖1分析，與對照組相比，實驗組HOXA7基因表達的產(chǎn)生的mRNA和蛋白質(zhì)含量都明顯減少了，說明成功建立可以用于后續(xù)實驗的Siha/si-HOXA7細胞系。

（3）據(jù)圖2分析，A圖顯示右圖培養(yǎng)皿中細胞數(shù)量明顯少于左圖培養(yǎng)皿，即實驗組細胞Siha/si-HOXA7克隆形成能力明顯減弱（增殖能力減弱/細胞周期阻滯 ）繼而導(dǎo)致細胞增殖能力降低，結(jié)合以上分析可以推測HOXA7基因能夠促進宮頸癌細胞體外增殖；結(jié)合流式細胞術(shù)檢測結(jié)果，推測HOXA7對人宮頸癌細胞的作用機制是G1期細胞增多， S期細胞減少。