Question

【題目】H1NI為單鏈RNA病毒，感染人類會(huì)引發(fā)甲型流感。對(duì)H1N1進(jìn)行基因組測(cè)序，發(fā)現(xiàn)HA基因是該病毒的一種特征基因�？赏ㄟ^(guò)檢測(cè)HA基因來(lái)檢測(cè)待測(cè)標(biāo)本中H1N1的含量，過(guò)程如下圖所示�；卮鹣铝袉�(wèn)題。

（1）對(duì)H1N1進(jìn)行基因組測(cè)序是測(cè)定RNA的__________序列。

（2）在過(guò)程①和②中，需分別向反應(yīng)體系加入_________酶和____________酶。

（3）過(guò)程②中對(duì)HA基因?qū)��?yīng)的cDNA序列進(jìn)行擴(kuò)增，需設(shè)計(jì)_____種引物。反應(yīng)體系中加入dATP、dTTP、dCTP和dGTP的作用是____________________。

（4）反應(yīng)體系中含有熒光物質(zhì)，每擴(kuò)增形成一條DNA鏈，就會(huì)出現(xiàn)一定強(qiáng)度的熒光信號(hào)。現(xiàn)欲檢測(cè)兩個(gè)標(biāo)本中H1N1的含量，可在熒光強(qiáng)度達(dá)到某一設(shè)定值時(shí)，觀察比較兩個(gè)反應(yīng)體系擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)，若某個(gè)標(biāo)木的循環(huán)次數(shù)較少，則其H1N1含量較____________。

（5）檢測(cè)HA基因還可以采用分子雜交技術(shù)。制備用放射性同位素標(biāo)記的、與A的基因互補(bǔ)的核酸序列作為_____與待測(cè)標(biāo)本中提取的總RNA雜交，若觀察到_____，則表明標(biāo)本中存在HA基因。

Answer 1

【答案】核糖核苷酸 逆轉(zhuǎn)錄 Taq 2 提供反應(yīng)所需的原料和能量 多 探針 雜交帶

【解析】

核酸分為脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），核苷酸是核酸的基本單位。脫氧核苷酸是脫氧核糖核酸的基本單位，核糖核苷酸是核糖核酸的基本單位。脫氧核苷酸由堿基、脫氧核糖和磷酸構(gòu)成。其中堿基有4種：腺嘌呤（A）、鳥(niǎo)嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（C）。DNA雙鏈的堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則為A－T、G－C。DNA在復(fù)制時(shí)，以親代DNA的每一個(gè)單鏈作模板，合成完全相同的兩個(gè)雙鏈子代DNA，每個(gè)子代DNA中都含有一個(gè)親代DNA鏈，這種現(xiàn)象稱為DNA的半保留復(fù)制。PCR是利用DNA在體外95℃高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60℃左右）時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72℃左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。

（1）RNA的基本單位是核糖核苷酸，因此對(duì)H1N1進(jìn)行基因組測(cè)序是測(cè)定RNA的核糖核苷酸序列。

（2）過(guò)程①為逆轉(zhuǎn)錄，過(guò)程②為PCR，需分別向反應(yīng)體系加入逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶（DNA聚合酶）。

（3）dATP dGTP dTTP dCTP這四種都是都是合成DNA的原料。同時(shí)，它們所攜帶的高能磷酸鍵，也可以為反應(yīng)提供能量。

（4）PCR擴(kuò)增過(guò)程中每擴(kuò)增形成一條DNA鏈，就會(huì)出現(xiàn)一定強(qiáng)度的熒光信號(hào)，隨著循環(huán)次數(shù)的增加，熒光信號(hào)逐漸積累，當(dāng)達(dá)到設(shè)定的熒光強(qiáng)度時(shí)，PCR反應(yīng)停止，此時(shí)可根據(jù)PCR擴(kuò)增儀上顯示的循環(huán)次數(shù)，判斷病毒的含量。達(dá)到設(shè)定的熒光強(qiáng)度時(shí)的循環(huán)次數(shù)較少，待測(cè)標(biāo)本中H1N1含量較多。

（5）分子雜交的原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)，用放射性同位素標(biāo)記的、與A的基因互補(bǔ)的核酸序列作為探針，若標(biāo)本中存在HA基因（本質(zhì)為RNA），則將標(biāo)本中的RNA提取出來(lái)，就能找到與探針結(jié)合的雜交帶。