Question

【題目】回答下列（一）、（ニ）兩小題。

（一）請回答釀酒、泡菜腌制、泡菜汁中嗜鹽微生物分離實(shí)驗(yàn)以及亞硝酸鹽測定的有關(guān)問題。

（1）家庭釀制米酒時(shí)，將米飯與酒曲混合裝壇約占______的空間。酒曲中含有的曲霉可將米飯中的營養(yǎng)物質(zhì)水解，從而有利于酵母菌進(jìn)行細(xì)胞呼吸，請列舉出酒曲中可能存在的酶(至少2種)：____________。

（2）泡制過程中起主要作用的微生物是_________和__________。

（3）分離計(jì)數(shù)嗜鹽微生物所用的接種工具是__________。根據(jù)培養(yǎng)基的用途，分離實(shí)驗(yàn)選用___________。判斷該培養(yǎng)基是否起了作用，需要設(shè)置的對照組是____________。

A．未接種的該培養(yǎng)基 B．未接種的LB培養(yǎng)基

C．接種了的LB培養(yǎng)基 D．接種了的該培養(yǎng)基

（4）測定亞硝酸鹽含量時(shí)，對25g樣品進(jìn)行適當(dāng)處理后定容至500mL，取10 mL樣品溶液顯色后，用光程為1cm的________在550nm處測定光密度值，繪制以亞硝酸鹽質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以光密度值為縱坐標(biāo)的_______

（二）2012年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予在“體細(xì)胞重編程”領(lǐng)域做出貢獻(xiàn)的科學(xué)家，如圖是將鼠的皮膚細(xì)胞“重新編程”為多功能干細(xì)胞，再導(dǎo)入早期胚胎，植入代孕鼠，產(chǎn)出嵌合體鼠的過程。請回答下列有關(guān)問題：

（1）4個(gè)關(guān)鍵基因(山中因子)作為______________通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)入小鼠的皮膚細(xì)胞內(nèi)，使其轉(zhuǎn)變成iPS細(xì)胞。在該技術(shù)中，逆轉(zhuǎn)錄病毒是這4個(gè)關(guān)鍵基因的________，在其協(xié)助下4個(gè)基因進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并整合到其染色體的_______上。

（2）培養(yǎng)iPS細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)液需要特別加入的天然成分是________，iPS細(xì)胞通過________(填字母)方法注入早期胚胎中。

A．細(xì)胞融合 B．顯微注射　C．胚胎移植 D．核移植

（3）早期胚胎通常要培養(yǎng)到________才能進(jìn)行移植，要使一個(gè)早期胚胎最終形成若干個(gè)基因型相同的嵌合體鼠，需要采用________的技術(shù)。

Answer 1

【答案】2/3 淀粉酶、糖化淀粉酶、蛋白酶等 假絲酵母 乳酸菌 玻璃刮刀 選擇培養(yǎng)基（或者高鹽的LB培養(yǎng)基） C 比色杯 標(biāo)準(zhǔn)曲線 目的基因 載體 DNA 動(dòng)物血清(或胎牛血清) B 8細(xì)胞以上(或桑椹胚或囊胚) 胚胎分割

【解析】

1、測定亞硝酸鹽含量是利用光電比色法，對比待測溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度來測定待測溶液的濃度。利用亞硝酸鹽在鹽酸酸化下與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸結(jié)合形成玫瑰紅色，該樣品的吸光度是比較待測溶液中亞硝酸鹽含量的標(biāo)準(zhǔn)。

2、基因工程中的運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。

3、胚胎干細(xì)胞簡稱ES或EK細(xì)胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）。特點(diǎn)：具有胚胎細(xì)胞的特性，體積較小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動(dòng)物任何一種組織細(xì)胞。另一方面，在體外培養(yǎng)條件下，ES細(xì)胞可不斷增殖而不發(fā)生分化，可進(jìn)行冷凍保存，也可以進(jìn)行某些遺傳改造。

（一）（1）酵母菌屬于兼性厭氧型生物，家庭釀制米酒時(shí)，將米飯與酒曲混合裝壇約占2/3的空間，酒曲中含有的曲霉可將米飯中的營養(yǎng)物質(zhì)水解，從而有利于酵母菌進(jìn)行細(xì)胞呼吸，同時(shí)酒曲中還含有蛋白酶、淀粉酶等。

（2）假絲酵母菌和乳酸菌在泡菜在腌制過程中起主要作用。

（3）分離計(jì)數(shù)嗜鹽微生物所用的接種工具是玻璃刮刀；該實(shí)驗(yàn)需要分離嗜鹽微生物，故分離培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)選用含鹽量高的選擇培養(yǎng)基，同時(shí)用接種了的LB培養(yǎng)基判斷是否起到了篩選作用。

（4）由于亞硝酸鹽在鹽酸酸化下與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸結(jié)合形成玫瑰紅色，故測定亞硝酸鹽含量采用光電比色法，樣品需要放在1cm比色杯中測定，在繪制曲線時(shí)，以光密度值為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（二）（1）目的基因主要指編碼蛋白質(zhì)的基因，結(jié)合題意可知，山中因子在基因工程中指目的基因，基因工程中常用病毒作為運(yùn)載體，在其協(xié)助下4個(gè)基因進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并整合到其染色體的DNA上。

（2）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞的方法是顯微注射法，由于早期胚胎培養(yǎng)動(dòng)物血清中含有細(xì)胞生長所必需的物質(zhì)，所以在體外培養(yǎng)胚胎時(shí)需要加入動(dòng)物血清。

（3）早期胚胎通常要培養(yǎng)到桑椹胚或囊胚階段才能進(jìn)行移植，要使一個(gè)早期胚胎最終形成若干個(gè)基因型相同的嵌合體鼠，需要采用胚胎分割技術(shù)。