Question

【題目】科學(xué)家利用植物生產(chǎn)藥用蛋白，研究出了用轉(zhuǎn)基因馬鈴薯生產(chǎn)人的血清白蛋白的方法。下圖表示EcoRⅠ、 BamH I兩種限制酶在質(zhì)粒上的切割位點(diǎn)，兩種酶識(shí)別和切割位點(diǎn)見(jiàn)下表。回答下列相關(guān)問(wèn)題。

(1)該工程中適宜用來(lái)切割質(zhì)粒的限制酶是___________，原因是___________。

(2)取血清白蛋白基因可以利用反轉(zhuǎn)錄法構(gòu)建的___________文庫(kù)中獲取，若利用PCR技術(shù)擴(kuò)増血清蛋白基因，設(shè)計(jì)引物序列的主要依據(jù)是___________，還需要在引物的一端加上___________序列，以便于后續(xù)的剪切和連接。

(3)將目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用___________處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，篩選含有目的基因的細(xì)胞需在培養(yǎng)基中添加___________。

(4)從含有血清白蛋白基因的馬鈴薯細(xì)胞中提取血清白蛋白，需通過(guò)___________過(guò)程養(yǎng)到愈傷組織，從其中提取有效成分。

Answer 1

【答案】BamH I 用EcoR I切割會(huì)將質(zhì)粒上的兩個(gè)抗性基因都破壞 cDNA 目的(血清蛋白)基因兩端的部分核苷酸序列 GGATCC Ca2+ 氨芐青霉素 脫分化

【解析】

基因工程的操作步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、把目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)和鑒定。

因?yàn)?/span>EcoRI同時(shí)存在于兩個(gè)標(biāo)記基因中，故不能用EcoRI切割，只能選擇BamHI切割目的基因和載體。

（1）限制酶切割時(shí)必須保證至少一個(gè)標(biāo)記基因的完整性，故不能選擇EcoRI切割，只能選擇BamHI切割目的基因和載體。

（2）反轉(zhuǎn)錄法構(gòu)建的是部分基因文庫(kù)，PCR擴(kuò)增的原理是DNA雙鏈復(fù)制，需要根據(jù)目的(血清蛋白)基因兩端的部分核苷酸序列合成2種引物，還需要再引物一端加上BamHI的識(shí)別序列GGATCC，以便于限制酶的切割。

（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體后，首先要把基因表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞中，導(dǎo)入之前需要用鈣離子處理農(nóng)桿菌細(xì)胞，使其處于感受態(tài)。然后再讓含目的基因的農(nóng)桿菌去感染馬鈴薯細(xì)胞，進(jìn)而把目的基因轉(zhuǎn)入馬鈴薯細(xì)胞中，因?yàn)榛�因表達(dá)載體中含有抗氨芐青霉素基因，故可以在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素進(jìn)行篩選。

（4）對(duì)馬鈴薯細(xì)胞需要經(jīng)過(guò)脫分化培養(yǎng)至愈傷組織階段，即可提取細(xì)胞產(chǎn)物血清白蛋白。