Question

回答基因工程中的有關問題：（15分）

Ⅰ．限制酶是基因工程中的重要工具酶，下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖甲、圖乙中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。請回答下列問題：

（1）一個圖甲所示的質粒分子經Sma Ⅰ切割前后，分別含有       個和_______ 個游離的磷酸基團？

（2）若對圖中質粒進行改造，插入的SmaⅠ酶切位點越多，質粒的熱穩(wěn)定性越        。

（3）與只使用EcoR I相比較，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ兩種限制酶同時處理質粒、外源DNA的優(yōu)點在于可以防止         。

Ⅱ．原核生物（如大腸桿菌）是基因工程中較理想的受體細胞，它們具有一些其他生物沒有的特點：①繁殖快②多為單細胞③______________等優(yōu)點．大腸桿菌細胞最常用的轉化方法是：首先用_________處理細胞，使之成為_________­­___細胞，然后完成轉化．

Ⅲ．植物基因工程中將目的基因導入受體細胞最常用的方法是__________,且一般將目的基因插入Ｔi質粒的____________中形成重組Ｔi質粒，這樣可將目的基因整合到受體細胞的染色體上，科學家發(fā)現：這樣得到的轉基因植株，其目的基因的傳遞符合孟德爾遺傳規(guī)律，則該轉基因植株一般為___________子。若要避免基因污染，一般需將目的基因導入植物細胞的__________DNA中。

 

Answer 1

【答案】

Ⅰ（1）0  2  （2）高   （3）質粒和含目的基因的外源DNA片斷自身環(huán)化

Ⅱ遺傳物質相對較少  Ca²⁺  感受態(tài)   Ⅲ．農桿菌轉化法  T-DNA   雜合  細胞質（線粒體、葉綠體）

【解析】

試題分析：Ⅰ（1）質粒分子經Sma Ⅰ切割前，為環(huán)狀DNA，無游離磷酸基團，切割后，Sma Ⅰ會2個脫氧核苷酸對（CG）之間的磷酸二酯鍵，露出2個游離磷酸基團。（2）插入的SmaⅠ酶切位點越多，堿基對CG越多，氫鍵越多，故質粒的熱穩(wěn)定性越高。（3）只使用EcoR I, 質粒、外源DNA自身都只含有1對互補黏性末端，自身會發(fā)生連接成為環(huán)狀DNA，不利目的基因導入。故使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ兩種限制酶同時處理質粒、外源DNA，各自會有不同黏性末端，能防止環(huán)化。

Ⅱ．原核生物（如大腸桿菌 ）是基因工程中較理想的受體細胞，具有一些其他生物沒有的特點：

繁殖快，能大量快速復制DNA；②多為單細胞，結構簡單，容易操作；③遺傳物質相對較少，不易對目的基因干擾。大腸桿菌細胞最常用的轉化方法是：首先用Ca²⁺處理細胞，使之成為感受態(tài)細胞，然后完成轉化．

Ⅲ．植物基因工程中將目的基因導入受體細胞最常用的方法是農桿菌轉化法。且一般將目的基因插入Ｔi質粒的T-DNA中形成重組Ｔi質粒，這樣可將目的基因整合到受體細胞的染色體上。移植入的目的基因為單個，故轉基因植株一般為雜合子。要避免基因污染，一般需將目的基因導入植物細胞的細胞質（線粒體、葉綠體），不會隨著花粉進行基因污染。

考點：本題考查基因工程相關知識，意在考查考生能理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系能力。