Question

研究發(fā)現(xiàn)：端粒在不同物種細(xì)胞中對于保持染色體穩(wěn)定性和細(xì)胞活性有重要作用，端粒酶是一種逆轉(zhuǎn)錄酶，能延長縮短的端粒(縮短的端粒使細(xì)胞復(fù)制能力受限)，從而增強(qiáng)體外細(xì)胞的增殖能力。端粒酶在正常人體組織中的活性被抑制，在腫瘤中被重新激活，端粒酶可能參與惡性轉(zhuǎn)化�？茖W(xué)家通過探究DNA載體途徑的RNA干擾技術(shù)抑制端粒酶的活性，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖以尋找一種抑制腫瘤細(xì)胞的新途徑。

方法思路：

①構(gòu)建干擾質(zhì)粒________(插入針對人體端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶亞基的mRNA的干擾序列)和對照質(zhì)粒PSG－CTR(插入不針對人體任何mRNA序列的對照組序列)。

②將空質(zhì)粒PSG(不含目的基因)、干擾質(zhì)粒和對照質(zhì)粒分別感染肝癌細(xì)胞。

③一段時間后觀察或檢測細(xì)胞的________。計(jì)算細(xì)胞凋亡率，繪制肝癌細(xì)胞生長曲線，結(jié)果如圖所示。

請據(jù)圖回答下面的問題。

(1)完成實(shí)驗(yàn)步驟中的空格：①________；③________。

(2)在構(gòu)建質(zhì)粒時，要將質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞并用________培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，鑒定后再提取。因此，在構(gòu)建的表達(dá)載體質(zhì)粒上必須含有________。

(3)端粒酶可以通過以自身的________為模板，________為原料來合成端粒DNA。

(4)請根據(jù)題意分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果并得出結(jié)論。

Answer 1

【解析】　(1)由曲線圖或柱形圖即可完善實(shí)驗(yàn)步驟。(2)基因工程用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選鑒定。(3)端粒酶是一種逆轉(zhuǎn)錄酶，能進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。(4)從柱形圖可知，PSG－AS導(dǎo)入肝癌細(xì)胞發(fā)揮作用后，端粒酶的活性降低，細(xì)胞凋亡率升高；從曲線圖可知，PSG－AS導(dǎo)入肝癌細(xì)胞發(fā)揮作用后，細(xì)胞生長受抑制。說明通過DNA載體途徑的RNA干擾技術(shù)抑制端粒酶的活性的方法能較好地抑制腫瘤細(xì)胞。

【答案】　(1)①PSG －AS�、鄱肆Ｃ傅幕钚�、凋亡情況、生長情況　(2)選擇　標(biāo)記基因　(3)RNA　4種脫氧核苷酸　(4)從結(jié)果可知PSG－AS導(dǎo)入肝癌細(xì)胞發(fā)揮作用后，端粒酶的活性降低，細(xì)胞凋亡率升高，細(xì)胞生長受抑制，說明通過DNA載體途徑的RNA干擾技術(shù)抑制端粒酶的活性的方法，能較好地抑制腫瘤細(xì)胞。