Question

科學(xué)家將人的生長(zhǎng)激素基因與大腸桿菌的DNA分子進(jìn)行重組，并成功地在大腸桿菌中得以表達(dá)。但在進(jìn)行基因工程的操作過(guò)程中，需使用特定的限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制性核酸內(nèi)切酶I的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—G^↓GATCC— ，限制性核酸內(nèi)切酶II的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—^↓GATC—，據(jù)圖回答：

（1）過(guò)程①所需要的酶是　　　　　。

（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體過(guò)程中，應(yīng)用限制性核酸內(nèi)切酶    　切割質(zhì)粒，用限制性核酸

內(nèi)切酶  　 切割目的基因。用限制酶切割目的基因和運(yùn)載體后形成的黏性末端通過(guò)___________    原則進(jìn)行連接。人的基因之所以能與大腸桿菌的DNA分子進(jìn)行重組，原因是      　　　   。

（3）在過(guò)程③一般將受體大腸桿菌用_________處理，以增大　　　　　的通透性，使含有

目的基因的重組質(zhì)粒容易進(jìn)入受體細(xì)胞。

（4）將得到的大腸桿菌B涂布在一個(gè)含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上得到如下圖a的結(jié)果（黑點(diǎn)表示菌落），能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌中已導(dǎo)入了            ，反之則沒(méi)有導(dǎo)入；再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基a上，使絨布表面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖b的結(jié)果（空圈表示與a對(duì)照無(wú)菌落的位置）。與圖b空圈相對(duì)應(yīng)的圖a中的菌落表現(xiàn)型是                ，這些細(xì)菌中導(dǎo)入了________________。

（5）圖中的重組質(zhì)粒的組成除了目的基因、標(biāo)記基因外，還必須有       、        

 

Answer 1

【答案】

（1）逆轉(zhuǎn)錄酶

（2）I　　II 　堿基互補(bǔ)配對(duì)　　人的基因與大腸桿菌DNA組成成分相同，結(jié)構(gòu)相似，并都遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則（回答出結(jié)構(gòu)相似便可）

（3）CaCl₂　 細(xì)胞壁

（4）普通質(zhì)�；蛑亟M質(zhì)粒 　抗氨芐青霉素和四環(huán)素抗性　　重組質(zhì)粒

（5）啟動(dòng)子 終止子

【解析】

試題分析：（1）以mRNA為模板合成DNA的過(guò)程稱為逆轉(zhuǎn)錄，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化。

（2）限制酶II能夠?qū)⑾拗泼窱的識(shí)別序列切割，而限制酶I不能將限制酶II的識(shí)別序列切割，為了防止質(zhì)粒被切出兩個(gè)切口，應(yīng)選擇限制酶I切割，而目的基因兩端的識(shí)別序列不同，應(yīng)選擇限制酶II切割；黏性末端連接的原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)原則；由于人的基因與大腸桿菌DNA組成成分相同，結(jié)構(gòu)相似，并都遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，所以人的基因能與大腸桿菌的DNA分子進(jìn)行重組。

（3）將目的基因?qū)�入到�?xì)菌細(xì)胞中的方法用CaCl₂處理，使其細(xì)胞壁通透性增強(qiáng)，便于將目的基因形成的重組DNA分子進(jìn)入。

（4）在氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能形成菌落的，說(shuō)明導(dǎo)入了普通質(zhì)�；蛑亟M質(zhì)粒，再在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖b的結(jié)果（空圈表示與a對(duì)照無(wú)菌落的位置）。與圖b空圈相對(duì)應(yīng)的圖a中的菌落表現(xiàn)型，形成菌落提是含有抗氨芐青霉素和四環(huán)素抗性，不能形成菌落的是含有重組質(zhì)粒的細(xì)菌。

考點(diǎn)：考查基因工程的知識(shí)。

點(diǎn)評(píng)：難度中等，理解限制酶I和限制酶II識(shí)別序列的關(guān)系。