Question

(9分)為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，沿海灘涂鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。我國科學(xué)家應(yīng)用耐鹽堿基因培育出了耐鹽堿水稻新品系。請據(jù)圖回答下列問題：

圖1　轉(zhuǎn)基因操作流程圖

表2　幾種限制酶識別序列及切割位點表

(1) 獲取真核生物的基因通常采用人工合成法，通過圖示中①方法合成的耐鹽堿基因中是不含____________的，如果要將耐鹽堿基因和質(zhì)粒重組，應(yīng)該在基因兩側(cè)的A和B位置除了接上以上兩個結(jié)構(gòu)外還需分別加入____________限制酶識別序列，這樣設(shè)計的優(yōu)點有利于質(zhì)粒和目的基因定向連接。

(2) 過程②采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，在PCR反應(yīng)體系需加入引物Ⅰ和引物Ⅱ等物質(zhì)，若目的基因擴(kuò)增4代，則共用了引物Ⅰ________個。

(3) 請畫出Pst Ⅰ切割DNA形成黏性末端的過程：__________________________。

(4) 圖示中將基因表達(dá)載體構(gòu)建完成后沒有直接導(dǎo)入農(nóng)桿菌，而是先將其導(dǎo)入大腸桿菌，目的是____________________。

(5) 在步驟⑤⑥過程中都需用__________________________處理兩類細(xì)菌。為了確認(rèn)目的基因通過⑦過程導(dǎo)入植物細(xì)胞中后是否成功表達(dá)，通常從分子水平進(jìn)行檢測的方法是用____________法。

(6) 假設(shè)該抗鹽堿基因D，通過基因工程導(dǎo)入水稻后連接到水稻的一條染色體上，則該水稻進(jìn)行減數(shù)分裂的細(xì)胞在聯(lián)會時有________個D基因。

 

Answer 1

【答案】

(1) 啟動子和終止子　EcoRⅠ、SmaⅠ

(2) 15

(3)

(4) 獲取大量重組質(zhì)粒(讓目的基因擴(kuò)增)

(5) Ca^2＋　抗原—抗體雜交

(6) 2

【解析】（1）由于目的基因的非編碼區(qū)不轉(zhuǎn)錄形成mRNA，所以反轉(zhuǎn)錄獲得的基因不含非編碼區(qū)，即不含啟動子和終止子。為了有利于質(zhì)粒和目的基因定向連接，應(yīng)選擇雙酶切，即選擇EcoRⅠ、SmaⅠ。

（2）目的基因擴(kuò)增4代，共形成16個DNA，需引物15個。

（3）黏性末端由兩條鏈構(gòu)成。

（4）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是讓目的基因擴(kuò)增，獲取大量重組質(zhì)粒。

（5）將目的基因?qū)�入�?xì)菌的方法是用Ca2+處理，使之處于感受態(tài)，檢測目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)，方法是抗原－抗體雜交法。

（6）該轉(zhuǎn)基因水稻中有一個基因D，聯(lián)會時DNA已復(fù)制，此時有2個D基因。