（16分）下面是在農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒基礎(chǔ)上構(gòu)建的植物抗蟲基因表達載體的示意圖。請據(jù)圖回答：

（1）為了擴大基因表達載體的數(shù)量，需將基因表達載體再植入農(nóng)桿菌中并對農(nóng)桿菌進行培養(yǎng)，此時，在培養(yǎng)農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基中應加入              ，該培養(yǎng)基按用途劃分屬于 。

（2）帶有抗蟲基因的農(nóng)桿菌進入棉花細胞后，要檢測抗蟲基因是否插入到棉花的染色體DNA上，常用的方法是               ；要檢測抗蟲基因在棉花體內(nèi)是否翻譯成蛋白質(zhì)，必需先從轉(zhuǎn)基因棉花中提取蛋白質(zhì)，再用相應的   方法來確定是否已形成毒蛋白；如果在個體水平上鑒定抗蟲基因是否轉(zhuǎn)化成功，可以通過   實驗來實現(xiàn)。

（3）Ti質(zhì)粒的分子大小有200kb（千堿基對）左右，然而能進入植物細胞的只有一小部分約25kb（稱為T—DNA）。在這一小部分的兩端各有一個25bp（堿基對）長的重復序列LB和RB，這兩個序列對這一小部分DNA進入植物細胞是不可缺少的。實驗證明只要Ti質(zhì)粒上保留了這兩個序列，即使這兩個序列之間的其它序列被不同程度地改變（如插入一個外源DNA片段），這一小部分也仍然可以轉(zhuǎn)移并整合到植物的基因組中。

①  在構(gòu)建的T—DNA過程中，還應該具有和  等結(jié)構(gòu)，才能保證進入植物體的抗蟲基因能夠順利表達。

②Ti質(zhì)粒不同于其它質(zhì)粒的最大特點就是它含有T—DNA，如果給你一個不含T—DNA的質(zhì)粒，你如何把它構(gòu)建成含有T—DNA的質(zhì)粒？               。

 

【答案】

【解析】

 

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相關(guān)習題

科目：高中生物 來源：黑龍江省哈六中2010-2011學年高二下學期期中考試生物試題 題型：071

下面是在農(nóng)桿菌Ti質(zhì)�；A(chǔ)上構(gòu)建的植物抗蟲基因表達載體的示意圖。請據(jù)圖回答：

（1）為了擴大基因表達載體的數(shù)量，需將基因表達載體再植入農(nóng)桿菌中并對農(nóng)桿菌進行培養(yǎng)，此時，在培養(yǎng)農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基中應加入________，該培養(yǎng)基按用途劃分屬于________。

（2）帶有抗蟲基因的農(nóng)桿菌進入棉花細胞后，要檢測抗蟲基因是否插入到棉花的染色體DNA上，常用的方法是________；要檢測抗蟲基因在棉花體內(nèi)是否翻譯成蛋白質(zhì)，必需先從轉(zhuǎn)基因棉花中提取蛋白質(zhì)，再用相應的________方法來確定是否已形成毒蛋白；如果在個體水平上鑒定抗蟲基因是否轉(zhuǎn)化成功，可以通過________實驗來實現(xiàn)。

（3）Ti質(zhì)粒的分子大小有200 kb（千堿基對）左右，然而能進入植物細胞的只有一小部分約25 kb（稱為T－DNA）。在這一小部分的兩端各有一個25 bp（堿基對）長的重復序列LB和RB，這兩個序列對這一小部分DNA進入植物細胞是不可缺少的。實驗證明只要Ti質(zhì)粒上保留了這兩個序列，即使這兩個序列之間的其它序列被不同程度地改變（如插入一個外源DNA片段），這一小部分也仍然可以轉(zhuǎn)移并整合到植物的基因組中。

①在構(gòu)建的T－DNA過程中，還應該具有________和________等結(jié)構(gòu)，才能保證進入植物體的抗蟲基因能夠順利表達。

②Ti質(zhì)粒不同于其它質(zhì)粒的最大特點就是它含有T－DNA，如果給你一個不含T－DNA的質(zhì)粒，你如何把它構(gòu)建成含有T－DNA的質(zhì)粒？________。

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科目：高中生物 來源：福建省三明一中2012屆高三第二次學段考生物試題 題型：071

下面是一項“利用轉(zhuǎn)基因番茄生產(chǎn)人胰島素的方法”的專利摘要，請回答：

發(fā)明利用轉(zhuǎn)基因番茄作為生物反應器生產(chǎn)人胰島素。所用的人胰島素基因是依據(jù)植物偏愛密碼子的原則來設(shè)計所含的密碼子，通過人工合成若干DNA片段，拼接而成，并且在C端加上KDEL的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列，避免胰島素在植物細胞中的降解。將該基因置于CaMV 35S啟動子和果實專一性啟動子2A12的驅(qū)動之下通過農(nóng)桿菌介導的方法轉(zhuǎn)入番茄中，在番茄的果實中表達人胰島素。

（1）此基因工程中的目的基因是_________，將人工合成的DNA片段拼接在一起，所需要的酶有_________。

（2）要想在體外獲得大量該目的基因的片段，可以采用_________技術(shù)。

（3）試分析在C端加上KDEL的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列，為什么可以避免胰島素在植物細胞中的降解？_________。

（4）用目的基因與農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒結(jié)合構(gòu)建表達載體，該表達載體的組成中不應含有的是_________（從下列選項中選擇）。

①目的基因

②CaMV 35S啟動子

③果實專一性啟動子2A12

④RNA引物

⑤標記基因

⑥T-DNA

⑦RNA聚合酶基因片段

⑧終止子

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科目：高中生物 來源：2014屆天津市六校高三上學期第一次聯(lián)考生物試卷（解析版） 題型：綜合題

（16分）Ⅰ.（8分）土壤農(nóng)桿菌是一種能引起雙子葉植物產(chǎn)生冠癭瘤的土壤細菌，它帶有一個大的質(zhì)粒叫Ti質(zhì)粒，它是攜帶細菌DNA向宿主植物基因組轉(zhuǎn)化所需信息的重要片段，只有T—DNA片段才轉(zhuǎn)入植物細胞的基因組。結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)化過程如圖所示，回答相關(guān)問題：

（1）為了使某種植物具有抗旱性狀而又不引起植物產(chǎn)生冠癭瘤，需對Ti質(zhì)粒進行修飾，即祛除瘤基因，將抗旱基因轉(zhuǎn)移至________，然后在一定條件下將外植體在含土壤農(nóng)桿菌的稀釋培養(yǎng)基上培養(yǎng)，此時修飾的T—DNA轉(zhuǎn)入植物細胞并整合到植物基因組中。以上過程需要的工具有                                          。

（2）將上述外植體置于一個含有某種抗生素的合適培養(yǎng)基中進行篩選，發(fā)生轉(zhuǎn)化的外植體開始增殖，形成________      ，通過產(chǎn)生不定芽再長出整個植物。

（3）基因轉(zhuǎn)化是否成功應對轉(zhuǎn)基因植物進行鑒定，可以直接在________水平對轉(zhuǎn)基因植物與非轉(zhuǎn)基因植物進行比較。

Ⅱ．（8分）請回答基因工程方面的有關(guān)問題：

(1)利用PCR技術(shù)擴增目的基因，其原理與細胞內(nèi)DNA復制類似（如圖所示）。

（1）圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。

①從理論上推測，第四輪循環(huán)產(chǎn)物中不含有引物B的DNA片段所占的比例為      。

②在第    輪循環(huán)產(chǎn)物中首次出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。

（2）PCR反應體系中含有的DNA聚合酶具有           特點，下面的表達式不能正確反映DNA聚合酶的功能，這是因為                   。

 

 

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科目：高中生物 來源：2010～2011學年度黑龍江省哈六中高二下學期期中考試生物試卷 題型：綜合題

（16分）下面是在農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒基礎(chǔ)上構(gòu)建的植物抗蟲基因表達載體的示意圖。請據(jù)圖回答：

（1）為了擴大基因表達載體的數(shù)量，需將基因表達載體再植入農(nóng)桿菌中并對農(nóng)桿菌進行培養(yǎng)，此時，在培養(yǎng)農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基中應加入             ，該培養(yǎng)基按用途劃分屬于。
（2）帶有抗蟲基因的農(nóng)桿菌進入棉花細胞后，要檢測抗蟲基因是否插入到棉花的染色體DNA上，常用的方法是              ；要檢測抗蟲基因在棉花體內(nèi)是否翻譯成蛋白質(zhì)，必需先從轉(zhuǎn)基因棉花中提取蛋白質(zhì)，再用相應的  方法來確定是否已形成毒蛋白；如果在個體水平上鑒定抗蟲基因是否轉(zhuǎn)化成功，可以通過  實驗來實現(xiàn)。
（3）Ti質(zhì)粒的分子大小有200kb（千堿基對）左右，然而能進入植物細胞的只有一小部分約25kb（稱為T—DNA）。在這一小部分的兩端各有一個25bp（堿基對）長的重復序列LB和RB，這兩個序列對這一小部分DNA進入植物細胞是不可缺少的。實驗證明只要Ti質(zhì)粒上保留了這兩個序列，即使這兩個序列之間的其它序列被不同程度地改變（如插入一個外源DNA片段），這一小部分也仍然可以轉(zhuǎn)移并整合到植物的基因組中。
① 在構(gòu)建的T—DNA過程中，還應該具有和 等結(jié)構(gòu)，才能保證進入植物體的抗蟲基因能夠順利表達。
②Ti質(zhì)粒不同于其它質(zhì)粒的最大特點就是它含有T—DNA，如果給你一個不含T—DNA的質(zhì)粒，你如何把它構(gòu)建成含有T—DNA的質(zhì)粒？              。

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