Question

【題目】用基因工程技術生產羧酸酯酶CarE)制劑的流程如下圖所示�；卮鹣铝袉栴}：

(1)①過程所需的酶是___________。在構建基因表達載體過程中，構建的重組質粒上啟動子的本質和作用是___________。

(2)實現(xiàn)②過程常用PCR技術，該技術的前提是要有___________，以便合成引物。為了便于擴增的DNA片段與表達載體連接，需在引物的5′端加上限制性酶切位點，且常在兩條引物上設計加入不同的限制性酶切位點，主要目的是___________。

(3)過程③將重組表達載體導入大腸桿菌時，首先用Ca2+處理大腸桿菌，目的是___________。然后將___________溶于級緩沖液與該大腸桿菌混合，在一定溫度下完成轉化。

Answer 1

【答案】逆轉錄酶 啟動子的本質是一段有特殊結構的DNA片段；作用是供RNA聚合酶的識別、結合以驅動目的基因的轉錄 一段已知目的基因的核苷酸序列 使DNA片段能定向插入表達載體，減少自連 使大腸桿菌處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài) 重組質粒（基因表達載體）

【解析】

分析圖解：圖中過程①表示利用mRNA通過反轉錄法合成相應的DNA；過程②表示利用PCR技術對目的基因進行擴增；過程③表示將目的基因導入受體細胞（大腸桿菌）；過程④表示通過篩選獲得工程菌。

（1）圖中過程①表示利用mRNA通過反轉錄法合成相應的DNA的過程，需要逆轉錄酶的催化；基因表達載體的組成成分包括目的基因、標記基因、啟動子、終止子等，其中啟動子的本質是一段有特殊結構的DNA片段，其作用是供RNA聚合酶的識別、結合以驅動目的基因的轉錄。

（2）利用PCR技術擴增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物；根據(jù)題意分析，在構建基因表達載體時，需要在引物的5′端加上限制性酶切位點，且常在兩條引物上設計加入不同的限制性酶切位點，主要目的是使DNA片段能定向插入表達載體，減少自連。

（3）在將目的基因導入大腸桿菌時，需要先用鈣離子處理大腸桿菌，使得大腸桿菌處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，然后將重組質粒溶于緩沖液中與該大腸桿菌混合，在一定溫度下完成轉化。