Question

【題目】下表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中切割位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識(shí)別序 列及切 割位點(diǎn)

(1)用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用________兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過(guò)________酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于________態(tài)的大腸桿菌。

(2)為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加________，平板上長(zhǎng)出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中______________。

(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端與BclⅠ酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為_______，對(duì)于該部位，這兩種酶________(填“都能”“都不能”或“只有一種能”)切開(kāi)。

(4)若用Sau3AⅠ切圖1質(zhì)粒最多可能獲得________種大小不同的DNA片段。

Answer 1

【答案】（1）BclI和HindⅢ 連接 感受

（2）四環(huán)素 引物甲和引物丙

（3）都不能

（4）7

【解析】（1）選擇的限制酶在目的基因的兩側(cè)都應(yīng)該有切割位點(diǎn)，又因?yàn)橛?/span>BamHⅠ酶會(huì)將兩個(gè)標(biāo)記基因都破壞，所以構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)只能選擇BclI和HindⅢ對(duì)質(zhì)粒和目的基因進(jìn)行切割，漏出兩種不同的粘性末端，再利用DNA連接酶將兩者定向連接。再將重組質(zhì)粒導(dǎo)入感受態(tài)的大腸桿菌進(jìn)行擴(kuò)增。

（2）由于構(gòu)建重組質(zhì)粒的時(shí)候，氨芐青霉素抗性基因被破壞，而四環(huán)素的抗性基因沒(méi)有被破壞，所以為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素。根據(jù)圖2可知對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)的引物應(yīng)該是引物甲和引物丙。

（3）根據(jù)表格中堿基分析，若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為，對(duì)于該部位，這兩種酶都不能切開(kāi)。

（4）根據(jù)表格分析可知Sau3A I可以切割BclI和BamHⅠ的切割位點(diǎn)，所以若用Sau3A I切圖1質(zhì)粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。